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        1. N-[(6-鹵-1H-吲唑-1-基)烷基]-2-氨基酸類化合物及其制備方法與應用與流程

          文檔序號:15511016發布日期:2018-09-22 00:15

          本發明屬于N-[(6-鹵-1H-吲唑-1-基)烷基]-2-氨基酸類化合物,具體涉及一種N-[(6-鹵-1H-吲唑-1-基)烷基]-2-氨基酸類化合物及其制備方法與應用。



          背景技術:

          氨基酸作為藥物的有效載體,可以增加藥物的脂溶性,促進細胞對藥物的有效吸收。氨基酸引入藥物分子以后,在生物體內水解可以釋放出氨基酸。從某種程度上可以緩解藥物對細胞的毒性。某些氨基酸自身就具有生物活性,可以輔助藥物的活性母體,提高抑菌作用。文獻報道,有的鹵代苯胺及其與金屬離子的絡合物具有良好的殺菌、抗癌、抗病毒及除草等生物活性。1995年Marcel等研究發現,鹵代咪唑類化合物的抗病毒與殺菌機理表明鹵代咪唑對該類化合物抑殺病原菌的活性起關鍵作用。因此含有鹵代咪唑類結構的化合物對新型殺菌、抗病毒的研制具有重要意義。與其相類似的雜環化合物鹵代吲唑及其衍生物研究較少。



          技術實現要素:

          針對現有技術的不足,本發明的目的在于提供一種N-[(6-鹵-1H-吲唑-1- 基)烷基]-2-氨基酸類化合物及其制備方法與應用,該類化合物因具有鹵代咪唑的類似結構,與病原菌的特異性酶具有良好的親和性,因此具有良好的殺菌和抑菌活性;引入氨基酸側鏈結構可以增強藥物的脂溶性,促進細胞對藥物的吸收。

          為解決現有技術問題,本發明采取的技術方案為:

          N-[(6-鹵-1H-吲唑-1-基)烷基]-2-氨基酸類化合物,具有如下結構通式:其中,X=Cl或Br;n=2~6;R1~R4=-H、-CH3、-CH(CH3)2、-CH2Ph;R5=-CH3、-C2H5。

          上述N-[(6-鹵-1H-吲唑-1-基)烷基]-2-氨基酸類化合物的制備方法,以鹵代苯胺及其衍生物為原料,經關環處理得鹵代吲哚及其衍生物;再將氨基酸溶于醇后,在堿性條件下生成氨基酸鹽類化合物;所得鹵代吲哚及其衍生物在堿性條件下與氨基酸鹽類化合物發生取代反應,再經過還原、酸化得N-[(6-鹵-1H-吲唑-1-基)烷基]-2-氨基酸或繼續酯化和純化處理得N-[(6-鹵-1H-吲唑-1-基)烷基]-2-氨基酸衍生物。

          反應式如下:

          作為改進的是,鹵代吲哚及其衍生物與氨基酸鹽類化合物的摩爾比為0.2-5: 1。

          進一步改進的是,鹵代吲哚及其衍生物與氨基酸鹽類化合物的摩爾比為 1-1.1:1。

          上述N-[(6-鹵-1H-吲唑-1-基)烷基]-2-氨基酸(酯)類化合物的制備方法,先將氨基酸溶解,室溫下轉化成氨基酸鹽類化合物,再在堿性條件下與鹵代苯胺及其衍生物發生取代反應生成鹵代苯胺的氨基酸鹽類化合物,關環處理后、經還原反應、酸化得N-[(6-鹵-1H-吲唑-1-基)烷基]-2-氨基酸或繼續酯化和純化處理得N-[(6-鹵-1H-吲唑-1-基)烷基]-2-氨基酸衍生物。

          反應式如下所示:

          作為改進的是,所述鹵代苯胺及其衍生物與氨基酸鹽類化合物的摩爾比為 0.2-5:1。

          進一步改進的是,所述鹵代苯胺及其衍生物與氨基酸鹽。類化合物的摩爾比為1-1.1:1。

          作為改進的是,所述堿性條件為堿劑水溶液,所述堿劑為碳酸鉀、碳酸鈉、碳酸鈣或碳酸銫中一種或多種混合而成,所述氨基酸鹽類化合物與堿劑的摩爾比為0.2-5:1。

          作為改進的是,所述還原反應的溫度為-10℃-40℃。

          基于上述N-[(6-鹵-1H-吲唑-1-基)烷基]-2-氨基酸類化合物在抑菌殺菌領域上的應用。

          有益效果:

          與現有技術相比,本發明N-[(6-鹵-1H-吲唑-1-基)烷基]-2-氨基酸類化合物,引入氨基酸側鏈,可以增強該類化合物的的脂溶性,大大增加了細胞對該類化合物的吸收,通式可以作為輔助藥物的活性母體,提高抑菌作用。

          本發明N-[(6-鹵-1H-吲唑-1-基)烷基]-2-氨基酸類化合物具有良好的抑菌活性,可作為殺菌劑及其前體化合物、生物制劑等的原料,適用于殺菌、抗病毒,除臭和去除皮膚表面的覆蓋物等等,可用做抗菌、抗病毒藥物、殺菌消毒劑以及日用化品、衛生整理劑等的殺菌成分,是對目前國內外缺乏靶向殺菌化合物及其制備方法的補充。

          依據GB15979-2002《一次性使用衛生用品標準》,在樣品0.05%與0.5%(以 10%DMF的水溶液溶解)濃度下,對N-[(6-鹵-1H-吲唑-1-基)烷基]-2-氨基酸類化合物進行了抑殺菌活性測試,結果表明,其對金黃色葡萄球菌具有強烈的抑殺菌活性,對白色念珠菌與大腸桿菌具有不同程度的抑殺菌活性。

          具體實施方式

          下面通過具體實施例對本發明作進一步詳細介紹。

          實施例1 N-[3-(6-氯-1H-吲唑-1-基)丙基]-2-氨基-3-甲基丁酸的合成

          在100mL圓底燒瓶中加入10mmol纈氨酸和30mL乙醇溶解,室溫下攪拌,并加入20mmol氫氧化鈉使纈氨酸成鹽,10分鐘后加入N-(3-溴丙基)-5-氯-2- 甲基苯胺10mmol,室溫下攪拌1.5h,反應過程需基本保持在pH=8左右,然后在醋酸做溶劑的條件下加入亞硝酸鈉,反應16h,再加入碳酸銫,用冰浴冷卻,穩定后用稀鹽酸將溶液體系調制pH=6-7左右,分批加入11mmol硼氫化鈉,反應0.5小時,溶液變為無色澄清,用稀鹽酸調溶液pH=3-4左右,調節過程中產生大量的白色沉淀。靜置,過濾,粗品用水和乙醇混合溶劑重結晶得純品,收率 81.2%,熔點173℃-174℃。

          實施例2 N-[3-(6-溴-1H-吲唑-1-基)丙基]-2-氨基-3-甲基丁酸的合成

          在100mL圓底燒瓶中加入N-(3-溴丙基)-5-溴-2-甲基苯胺10mmol,然后加入亞硝酸鈉-醋酸溶液,室溫反應16h后,經TLC檢測顯示反應完全,將10mmol 纈氨酸溶于30mL乙醇溶解,并加入20mmol氫氧化鈉,室溫下攪拌,室溫下攪拌得纈氨酸鈉鹽溶液。

          然后將纈氨酸鈉鹽溶液加入到上述反應液中,溶液的顏色立刻加深,并逐漸伴隨有沉淀生成,室溫下攪拌1.5h,反應過程維持pH為8左右,經TLC檢測顯示反應完全,再加入碳酸銫,冰浴冷卻處理,穩定后用稀鹽酸調節pH至6-7 左右,分批加入11mmol硼氫化鈉,隨著硼氫化鈉的加入,溶液迅速消色,0.5 小時后,溶液變為無色澄清,經TLC檢測顯示反應完全,用稀鹽酸調溶液pH 至3-4左右,調節過程中產生大量的白色沉淀。靜置,過濾,粗品用水和乙醇的混合溶劑重結晶得純品,收率72.7%,熔點197℃-198℃

          實施例3 N-[3-(6-氯-4,5,7-三甲基-1H-吲唑-1-基)丙基]-2-氨基-3-甲基丁酸的合成

          在100mL圓底燒瓶中加入10mmol纈氨酸和30mL乙醇,室溫攪拌,加入 20mmol氫氧化鈉使纈氨酸成鹽,10分鐘后加入N-(3-溴丙基)-3-氯-2,4,5,6-四甲基苯胺10mmol,室溫下攪拌1.5h,反應整個過程需基本保持在pH=8左右,然后在醋酸做溶劑的條件下加入亞硝酸鈉,反應16h后,再加入碳酸銫,用冰浴冷卻,穩定后用稀鹽酸將溶液體系調制pH=6~7左右,分批加入11mmol硼氫化鈉,反應0.5小時,溶液變為無色澄清,用稀鹽酸調溶液pH=3~4左右,調節過程中產生大量的白色沉淀。靜置,過濾,粗品用水和乙醇混合溶劑重結晶,收率 82.3%,熔點185℃~186℃。

          實施例4 N-[3-(6-溴-4,5,7-三甲基-1H-吲唑-1-基)丙基]-2-氨基-3-甲基丁酸的合成

          在100mL圓底燒瓶中加入N-(3-溴丙基)-3-溴-2,4,5,6-四甲基苯胺10mmol,然后加入亞硝酸鈉-醋酸溶液,室溫反應16h后,經TLC檢測顯示反應完全,將 10mmol纈氨酸溶于30mL乙醇溶解,并加入20mmol氫氧化鈉,室溫下攪拌得纈氨酸鈉鹽溶液。

          然后將然后將纈氨酸鈉鹽溶液加入到上述反應液中,溶液的顏色立刻加深,并逐漸伴隨有沉淀生成,室溫下攪拌1.5h,反應過程維持pH為8左右,經TLC 檢測顯示反應完全,再加入碳酸銫,冰浴冷卻處理,穩定后用稀鹽酸調節pH至 6-7左右,分批加入11mmol硼氫化鈉,隨著硼氫化鈉的加入,溶液迅速消色, 0.5小時后,溶液變為無色澄清,經TLC檢測顯示反應完全,用稀鹽酸調溶液 pH至3-4左右,調節過程中產生大量的白色沉淀。靜置,過濾,粗品用水和乙醇的混合溶劑重結晶得純品,收率88.4%,熔點200℃。

          實施例5 N-[3-(6-氯-5,7-二甲基-1H-吲唑-1-基)丙基]-2-氨基-3-甲基丁酸的合成

          在100mL圓底燒瓶中加入10mmol纈氨酸和30mL乙醇,室溫攪拌,加入 20mmol氫氧化鈉使纈氨酸成鹽,10min后分批加入N-(3-溴丙基)-3-氯-2,4,6- 三甲基苯胺10mmol,室溫攪拌1.5h,反應整個過程需基本保持在pH=8左右,然后在醋酸做溶劑的條件下加入亞硝酸鈉,反應16h,再加入碳酸銫,然后用冰浴冷卻,用稀鹽酸將溶液體系調制pH=6~7左右,分批加入11mmol硼氫化鈉, 0.5小時后溶液變為無色澄清,用稀鹽酸調溶液pH=3~4左右,用乙酸乙酯萃取 (3×100mL),合并有機相,依次用水和飽和食鹽水洗滌,無水硫酸鈉干燥,過濾減壓蒸除溶劑得粗品,用石油醚/乙酸乙酯(8:1)作洗脫劑,柱層析分離后得純品 N-[3-(6-氯-5,7-二甲基-1H-吲唑-1-基)丙基]-2-氨基-3-甲基丁酸,收率56.2%,熔點187℃。

          實施例6 N-[3-(6-溴-5,7-二甲基-1H-吲唑-1-基)丙基]-2-氨基-3-甲基丁酸的合成

          在100mL圓底燒瓶中加入10mmolN-(3-溴丙基)-3-溴-2,4,6-三甲基苯胺,用適量醋酸做溶劑,加入亞硝酸鈉反應16h。將10mmol纈氨酸用30mL乙醇溶解,在溶液中加入20mmol氫氧化鈉,室溫下攪拌使纈氨酸成纈氨酸鈉鹽溶液。

          然后將纈氨酸鈉鹽溶液加入到上述反應液中,溶液的顏色立刻加深,并逐漸伴隨有沉淀生成,室溫下攪拌1.5h,反應過程維持pH為8左右,經TLC檢測顯示反應完全,再加入碳酸銫,冰浴冷卻處理,穩定后用稀鹽酸調節pH至6-7 左右,分批加入11mmol硼氫化鈉,隨著硼氫化鈉的加入,溶液迅速消色,0.5 小時后,溶液變為無色澄清,經TLC檢測顯示反應完全,用稀鹽酸調溶液pH 至3-4左右,用乙酸乙酯萃取(3×100mL),合并有機相,依次用水和飽和食鹽水洗滌,無水硫酸鈉干燥,過濾,減壓蒸除溶劑得粗品,用石油醚/乙酸乙酯(8:1) 作洗脫劑,柱層析分離后得純品N-[3-(6-溴-5,7-二甲基-1H-吲唑-1-基)丙基]-2-氨基-3-甲基丁酸,收率56.6%,熔點193℃。

          實施例7 抑菌活性測試

          實驗檢測依據以及菌懸液、活菌計數均參照GB15979-2002《一次性使用衛生標準》。本實驗所用菌珠,包括白色念珠菌、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌,均由中國科學院微生物研究所提供,所用的培養基為沙氏瓊脂培養基和營養瓊脂培養基;試驗樣品濃度為0.05%;空白溶液濃度為DMF:水=4:45。

          具體操作如下:

          將試驗菌24h斜面培養物用PBS洗下,制成菌懸液(要求的濃度為:用100μL 滴于對5mL樣液內,回收菌數為1×104~9×104cfu/mL)。

          取被試樣液(5mL)和對照樣液(與試樣同質材料、同樣大小,但不含抗菌材料,且經菌處理)各4管。

          取上述菌懸液,分別在每個被試樣液和對照樣液上各滴加100μL,均勻混合,開始計時,作用于20min,用無菌移液管分別取樣液(0.5mL)投入含5mLPBS的試管內,充分混勻,做適當稀釋,然后取其中2~3個稀釋度,分別取樣液(0.5mL),置于兩個培養皿,用40~45℃的沙氏瓊脂培養基(酵母菌)15mL作傾注,轉動平皿,使其充分混勻,瓊脂凝固后翻轉平板,35℃±2℃培養48h(細菌)。作活菌菌落計數,實驗重復一次,按下式計算抑菌率:

          X1=(A-B)/A×100%

          式中:X1……抑菌率,100%;

          A······對照樣品平均菌落數;

          B······被試樣品平均菌落數。

          具體抑菌測試數據見表1。

          表1 N-[(6-鹵-1H-吲唑-1-基)烷基]-2-氨基酸(酯)類化合物的抑菌率統計表

          實施例8 殺菌活性測試

          試驗檢測依據以菌懸液、活菌計數均依照GB15979-2002《一次性使用衛生標準》。本實驗所用菌珠,包括白色念珠菌、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌,均有中國科學院微生物研究所提供,所用的培養基為沙氏瓊脂培養基和營養瓊脂培養基;試驗樣品濃度為0.05%;空白溶液濃度為DMF:水=4:45。

          將試驗菌24h斜面培養物用PBS洗下,制成菌懸液(要求的濃度為:用100μL 滴于對5mL樣液內,回收菌數為1×104~9×104cfu/mL)。

          取被試樣液(5mL)和對照樣液(與試樣同質材料、同樣大小,但不含抗菌材料,且經殺菌處理)各4管。

          取上述菌懸液,分別在每個被試樣液和對照樣液上各滴加100μL,均勻混合,開始計時,作用于20min,用無菌移液管分別取樣液(0.5mL)投入含5mL中和試管內,充分混勻,10min后,然后取其中1個稀釋度,分別取樣液(0.5mL),置于兩個培養皿,用40~45℃的沙氏瓊脂培養基(酵母菌)15mL作傾注,轉動平皿,使其充分混勻,瓊脂凝固后翻轉平板,35℃±2℃培養48h(細菌)。作活菌菌落計數,實驗重復一次,按下式計算抑菌率:

          X2=(A-B)/A×100%

          式中:X2······殺菌率,100%;

          A······對照樣品平均菌落數;

          B······被試樣品平均菌落數。

          具體殺菌測試數據見表2。

          表2 N-[(6-鹵-1H-吲唑-1-基)烷基]-2-氨基酸(酯)類化合物的殺菌率統計表

          注:殺菌率》90%,產品有殺菌作用。

          通過上述實驗可知,N-[(6-鹵-1H-吲唑-1-基)烷基]-2-氨基酸類化合物的合成通過先在亞硝酸鈉的條件下關環再與氨基酸鹽類化合物在堿性條件下發生取代反應最后經過還原酸化得到目標化合物比鹵代苯胺及其衍生物在堿性條件下與氨基酸鹽類化合物發生取代反應再在亞硝酸鈉條件下關環經還原酸化得到目標化合物操作簡便,產率高,副產物少以及后處理簡單等優點。

          N-[(6-鹵-1H-吲唑-1-基)烷基]-2-氨基酸類化合物對金黃色葡萄球菌具有優良的抑菌率,,對于白色念珠菌與大腸桿菌不同的化合物顯示出不同的、低于金黃色葡萄球菌的抑菌率;N-[(6-鹵-1H-吲唑-1-基)烷基]-2-氨基酸類化合物對金黃色葡萄球菌顯示出優異的殺菌效果,對大腸桿菌沒有殺菌效果,對于白色念球菌與化合物有關,總之化合物對白色念珠菌與大腸桿菌的殺菌性低于金黃色葡萄球菌。

          綜上所述,本發明N-[(6-鹵-1H-吲唑-1-基)烷基]-2-氨基酸類化合物的制備不僅技術簡單,操作安全、方便,且由于化合物中含有氨基酸類結構,從而大大的促進了化合物的脂溶性進而促進細胞對該系列化合物的吸收等。氨基酸引入藥物分子中,在體內經過水解生成氨基酸類化合物,從某種程度上可以減輕了藥物對細胞的毒性等作用。因此,該類化合物可以作為小分子生物制劑的原料,制備可用作抗病毒劑、抗抑郁劑、抗高血壓劑、抗瘧疾劑、抗過敏藥物、殺菌劑或農藥等。

          另外,本發明不限于上述實施方式,只要在不超出本發明的范圍內,可以采取各種方式實施本發明。

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