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        1. 一类芳香酰胺化合物及其制备方法和用途与流程

          文档序号:15511012发布日期:2018-09-22 00:15

          本发明涉及一类芳香酰胺化合物及其制备方法以及其作为药物的应用,所述化合物具有抵抗雄激素并且降解雄激素受体的作用,可用于前列腺癌、前列腺增生、乳腺癌、膀胱癌、粉刺、多毛、脱发等与雄激素相关的疾病治疗。



          背景技?#37232;?/b>

          雄激素受体属于核受体家族,是由配体诱导的核转?#23478;?#23376;的受体。雄激素受体是一种重要的细胞调节蛋白,它通过内源性雄激素在一系列的生理过程中起着重要的作用,包括男性第二性征发育和维护,包括肌肉和骨骼的质量,男性毛发,前列腺的生长,精子发育等。内源性甾体雄激素被称为男性性激素,包括?#21644;?#21644;二氢?#21644;―HT)。?#21644;?#26159;在男性血清中发现的主要的甾体雄激素,它主要由?#21644;?#20998;泌的。在许多外周组织,如前列腺和皮肤,?#21644;?#21487;被5α-还原酶转化为活性更强的雄激素二氢?#21644;―HT)。

          许多疾病和雄激素水平有关。男性随着年龄的增长,体内雄激素水平会逐渐下降,伴随着肌肉减少、骨质疏松、性功能下降等。相反,体内雄激素水平过高也会引起一些疾病,如前列腺癌、前列腺增生、粉刺、多毛、脱发等与雄激素相关的疾病。

          前列腺癌是激素依赖性的,因此前列腺癌的内分泌治疗是最久使用、最成熟,也是最有效的手段。早在1941年,Huggins和Hodges发现了手术去势,如手术切掉双侧?#21644;?#20197;消除?#21644;?#26469;源,和雌激素可延缓转移性前列腺癌的进展,并首次证实了前列腺癌对雄激素去除的反应性。但是临床研究表明,单纯切掉?#21644;?#21487;以降?#33073;?#28082;中雄激素的含量,但并不能大幅度的降低前列腺组织中雄激素的含量,因为前列腺组织中存在利用肾上腺分泌的甾体为原料合成雄激素的酶系统,并可转化雄激素?#21644;?#20026;活性更强的雄激素二氢?#21644;?#22240;此,即使采取了去势疗法,对于前列腺癌,抗雄激素药物治疗也是必须的。

          应用抗雄激素药物(雄激素拮抗剂)竞争性阻断雄激素与前列腺细胞上雄激素受体的结合,是目前治疗前列腺癌的标准治疗方法。常用非甾体雄激素受体拮抗剂有氟他胺(Flutamide)、比卡鲁胺(Bicalutumide)和恩杂鲁胺(Enzalutamide,商品名:Xtandi)。

          氟他胺(Flutamide)是第一代非甾体雄激素受体拮抗剂 (Endocrinology 1972, 91, 427–437;Biochemical Society Transactions 1979, 7, 565–569;Journal of Steroid Biochemistry 1975, 6, 815–819),其代谢产物2一羟基氟他胺是其主要活性形式,能在靶组织内与雄激素受体结合,阻断二氢?#21644;?#32032;与雄激素受体结合,抑制靶组织摄取?#21644;?#32032;,从而起到抗雄激素作用。因服用量较大,长期服用会造成男子乳房发育,伴有肿瘤和压痛,并有恶心、呕吐、腹泻、偶尔出?#21046;?#32932;反应,变性红血蛋白性贫血,白细胞及血小板减少。另外,氟他胺在治疗中易产生抗雄激素撤除综合症,少数病人有肝毒性等问题。

          比卡鲁胺(Bicalutumide)是第二代非甾体雄激素受体拮抗剂 (The Journal of Endocrinology 1987, 113, R7–R9;Urologic Clinics of North America 1991, 18, 99–110)。此药物是一个消旋异构体,其活性成分为左旋异构体。比卡鲁胺除具有抗雄激素作用外,疗效高于氟他胺,而副作用减少了70%。与氟他胺类似,能在靶组织内与雄激素受体结合,阻断二氢?#21644;?#32032;与雄激素受体结合,抑制靶组织摄取?#21644;?#32032;,从而起到抗雄激素作用。其缺点是,经过一定中位期(一般18~24个月)后,几乎所有患者最终都会发展为激素抵抗性前列腺癌。另外,比卡鲁胺在治疗中也产生抗雄激素撤除综合症等问题。

          恩杂鲁胺(Enzalutamide,商品名:Xtandi),是第三代非甾体雄激素受体拮抗剂(Archives of Pharmacal Research 2015,38(11): 2076–82),美国FDA 于2012年批准该药上?#23567;?#26159;更强的雄激素受体拮抗,为内分泌治疗增添了新的药物。缺点是价格昂贵,并且也会发展为激素抵抗性前列腺癌。另外,恩杂鲁胺在治疗中发现能引起患者抽搐的副作用,因此其应用受到一定限制。

          因此,开发比现有药物更安全有效的新型抗雄激素药物在治疗与雄激素相关疾病的研究中具有重要的价值和地位。



          技术实现要素:

          本发明的目的在于发现一种新型的安全有效的抗雄激素药物。

          本发明人为了实现上述目的进行?#26494;?#20837;地研究,结果发现:具有特定结构的芳香酰胺类化合物具有抵抗雄激素活性并具有可降解雄激素受体作用、与现有药物相比更为安全有效,由此完成了本发明。

          即,本发明提供以下通式I所示的芳香酰胺化合物或其药学上可接受的盐(以下亦称为本发明化合物),其是比现有药物更安全有效的新的具有抵抗雄激素活性且具有可降解雄激素受体作用的一类化合物,可用于治疗与雄激素相关的疾病,如前列腺癌、前列腺增生、乳腺癌、膀胱癌、粉刺、多毛、脱发等。

          其中R1和R2各自独立地为氢原子、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C2-6烯基、C2-6?#19981;3-6环烷基、氰基、硝基、卤素或?#34987;?#25152;述C1-6烷基、C1-6烷氧基、C2-6烯基、C2-6?#19981;?#21644;C3-6环烷基任选地被1个以上的卤素原子取代;

          R3和R4各自独立地为氢原子、羟基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C2-6烯基、C2-6?#19981;?#25110;C3-6环烷基;

          R5和R6各自独立地为氢原子、卤素、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C2-6烯基、C2-6?#19981;3-6环烷基、氰基、硝基、?#34987;1-6烷基羰基、羟基C1-6烷基、C1-6烷基-NH-C(=O)-或芳基,所述C1-6烷基、C1-6烷氧基、C2-6烯基、C2-6?#19981;3-6环烷基和芳基任选地被选自C1-6烷基、卤素、氰基、硝基中的1个以上的取代基取代;

          X为碳原子或氮原子;和

          Y和Q各自独立地为碳原子、氮原子、氧原子,或硫原子;n为2或3。

          在本发明的较佳实施方案中,R1和R2各自独立地为氢原子、任选地被1个以上的卤素原子取代的C1-6烷基、氰基、硝基、卤素或?#34987;?#26356;优选R1和R2各自独立地为氢原子、氰基、硝基、卤素或被1~3个卤素原子取代的C1-4烷基,其中所述被1~3个卤素原子取代的C1-4烷基优选是被1~3个氟原子取代的C1-4烷基,更优选是被1~3个氟原子取代的甲基,特别优选是三氟甲基。

          在本发明的较佳实施方案中,R3和R4各自独立地为氢原子、羟基、或C1-6烷基,更优选R3和R4各自独立地为氢原子、羟基、或C1-4烷基,特别优选R3和R4各自独立地为羟基或甲基。

          在本发明的较佳实施方案中,R5和R6各自独立地为氢原子、卤素、任选地被1个以上的卤素原子取代的C1-6烷基、氰基、硝基、C1-4烷基羰基、羟基C1-4烷基、C1-4烷基-NH-C(=O)-或芳基;

          优选R5和R6各自独立地为氢原子、卤素、被1~3个卤素原子取代的C1-4烷基、氰基、硝基、C1-4烷基羰基、1-羟基?#19968;-甲基?#34987;?#30002;酰基或芳基。其中所述被1~3个卤素原子取代的C1-4烷基优选是被1~3个氟原子取代的C1-4烷基,更优选是被1~3个氟原子取代的甲基,特别优选是三氟甲基,所述C1-4烷基羰基优选?#19988;?#37232;基。

          在本发明的较佳实施方案中,Y和Q各自独立地为碳原子、或氮原子;优选Y和Q均为碳原子或氮原子。

          在本发明的较佳实施方案中,本发明的芳香酰胺化合物具有以下通式II所示的结构:

          其中,R1、R2、R3、R4、R5、R6和X的含义分别与上述的定义相同。

          在本发明的较佳实施方案中,本发明的芳香酰胺化合物具有以下通式III所示的结构:

          其中,R1、R2、R3、R4、R5、R6和X的含义分别与上述的定义相同。

          在上述通式I、II和III分子中有手性原子,在本发明中本发明化合物可为消旋体、左旋(R构型)和/或右旋(S构型)。因此,本发明还包括通式I所示的芳香酰胺化合物或其药学上可接受的盐的立体异构体,即它们的左旋、右旋和/或消旋体。

          在本发明的较佳实施方案中,本发明通式I所示的化合物优选为下列芳香酰胺化合物及其药学上可接受的盐:

          本发明还包括通式I所示的芳香酰胺化合物、其药学上可接受的?#20301;?#20854;立体异构体的水合物、体内一级和/或二级代谢物及前药。

          作为体内一级代谢物的例子,例如可以列举:

          通式I所示的芳香酰胺化合物           体内一级代谢物

          通式I所示的芳香酰胺化合物          体内一级代谢物

          通式I所示的芳香酰胺化合物           体内一级代谢物

          通式I所示的芳香酰胺化合物           体内一级代谢物。

          作为体内二级代谢物的例子,例如可以列举:

          作为体内一?#37117;?#20108;级代谢物的例子,例如可以列举:

          作为前药的例子,例如可以列举:

          本发明的另一个目的是提供所述通式I所示的芳香酰胺化合物的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:化合物IV和化合物V(均可直?#30001;?#36141;或分别按文献Tetrahedron 1979, 2337-2343和Tetrahedron 1979, 2345-2352方法合成)反应得到化合物VI,再与叠氮化合物,如叠氮钠(NaN3)反应转化为化合物VII。化合物VII被催化氢化还原为化合物VIII。化合物VIII和化合物IX在EDCI([1-?#19968;?3-(3-二甲?#34987;?#19993;基)碳二亚胺](1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide))和HOBt(羟基苯并三唑(Hydroxybenzotriazole))的存在下(IX为酸时)或在碱性条件下(IX为酰氯时)反应生成结构通式I所示的目标化合物,其化学反应式如下:

          相应的手性化合物的制备可先商购或制备光学纯的起始化合物X或XV(按文献Tetrahedron 1979, 2337-2343, Tetrahedron 1979, 2345-2352方法合成), 再按以下所述路线合成目标化合物, 例如合成S构型的目标化合物(XIV):

          再如合成R构型的目标化合物(XIX):

          其中化学反应式中所示的R1、R2、R5、R6、X、Y、Q和n的定义与通式I中所述的R1、R2、R5、R6、X、Y、Q和n的定义相同。

          本发明所涉及的一些通式I所示的化合物(其中R3为甲基,R4为羟基)也可按以下路线合成:化合物XX与过氧乙酸、三氟过氧乙酸、过氧化氢、过氧苯甲酸等过氧化物(作为氧化剂)反应转化为环氧化合物XXI, 再与叠氮化合物,如叠氮钠(NaN3)反应转化为化合物XXII。?#32531;?#21270;合物XXII被催化氢化还原为化合物XXIII。化合物XXIII和化合物IX在EDCI和HOBt存在的下(IX为酸时)或在碱性条件下(IX为酰氯时)反应生成化合物XXIV。

          其中化学反应式中所示的R1、R2、R5、R6、X、Y、Q和n的定义与上述的通式I中的相同。

          其中,“”表示化合物IX为(酸)或(酰氯)。

          本发明的再一个目的是提供所述通式I所示的芳香酰胺化合物或其药学上可接受的盐在制备治疗或预防与雄激素相关的疾病的药物方面的应用。

          本发明的又一个目的是提供治疗或预防与雄激素相关的疾病的方法,包括给予有此需要的哺乳动物治疗或预防有效量的通式I所示的化合物或其药学上可接受的盐。

          在本发明的较佳实施方案中,所述与雄激素相关的疾病包括前列腺癌、前列腺增生、乳腺癌、膀胱癌,粉刺、多毛、脱发等。

          在本发明中,术语“卤素”是指氟、?#21462;?#28340;或碘。

          在本发明中,“C1-6烷基”是指碳原子数1~6的直链或者支链的脂肪族饱和烃基,例如,作为具体的基团,可以列举甲基、?#19968;?#19993;基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基、异戊基、己基等。其中优选是碳原子数为1~4个的C1-4烷基,更优选是碳原子数为1~3个的C1-3烷基。

          在本发明中,“C2-6烯基”是指具有不饱和双键的碳原子数2~6个的直链或者支链状的脂肪族烃基,例如可以列举乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、2-甲基-1-丙烯基、2-甲基-2-丙烯基、2-丁烯-1-基、3-丁烯-1-基、2-戊烯-1-基、3-戊烯-1-基、4-戊烯-1-基、5-?#21512;?1-基、4-?#21512;?1-基、3-?#21512;?1-基、2-?#21512;?1-基等。其中优选是碳原子数为2~4个的C2-4烯基,更优选是碳原子数为2~3个的C2-3烯基。

          在本发明中,“C2-6?#19981;?#26159;指具有不饱和三键的碳原子数2~6个的直链或者支链状的脂肪族烃基,例如可以列举乙?#19981;?-丙炔-1-基、2-丙炔-1-基、2-丁炔-1-基、3-丁炔-1-基、2-戊炔-1-基、3-戊炔-1-基、4-戊炔-1-基、5-己炔-1-基、4-己炔-1-基、3-己炔-1-基和2-己炔-1-基等。其中优选是碳原子数为2~4个的C2-4?#19981;?#26356;优选是碳原子数为2~3个的C2-3?#19981;?/p>

          在本发明中,“C3-6环烷基”是指碳原子数3~6个的环状脂肪族烃基,例如,作为具体的基团可以列举环丙基、环丁基、环戊基和?#33459;?#22522;等。

          在本发明中,“C1-6烷氧基”是指键合有上述定义的“C1-6烷基”的氧基,例如可举出:甲氧基、乙氧基、1-丙氧基、2-丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基等。

          在本发明中,“C1-6烷基羰基”是指上述定义的“C1-6烷基”与羰基(-C(=O))键合而成的基团,例如可以举出:乙酰基、丙酰基、丁酰基、异丁酰基、戊酰基、异戊酰基、特戊酰基等。

          在本发明中,“羟基C1-6烷基”是指上述定义的“C1-6烷基”被羟基取代而成的基团,例如可以举出:1-羟基?#19968;?()、2-羟基?#19968;?-羟基丙基 、2-羟基丙基、3-羟基丙基、1-羟基丁基 、2-羟基丁基、3-羟基丁基、4-羟基丁基等。

          应予说明,上述定义中,例如“C1”等的“C”表示碳原子,其后附带的数字表示碳原子数。例如,“C1-6”表示碳原子数1到碳原子数6的?#27573;А?/p>

          在本发明中,表述“任选被1个以上的基团(取代基)取代”是指任选地在要被取代的基团的任意的位置用1个或多个相同或不同的基团(取代基)取代。例如,“C1-6烷基任选地被1个以上的卤素原子取代”是指C1-6烷基可以不被取代,或者可以在C1-6烷基的任意的可被取代的位置用1个或多个卤素原子取代。

          在本发明中,通式?#20063;?#30340;环中的“”表示该环为不饱和环。

          在本发明中,术语“芳基”是?#32925;?#34987;取代或被取代基取代的5-10元具有芳香性的单环或双环系碳环基?#21589;?#21547;有选自N、O和S的杂原子的单环或双环系杂环基团,其中双环系的一个环可以是被氢化的;包括例如苯基、萘基、二氢萘基、四氢萘基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、呋喃基、咪唑基、吡喃基、吡唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、异噻唑基、噻吩基、嘌呤基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、二嗪基、异苯并噻吩基、异苯并呋喃基、吲哚基、异吲哚基、喹啉基、异喹啉基等;所述取代基选自氢原子、烷基、卤素、三氟甲基、氰基、硝基、等基团。

          在本发明中,所述“药学上可接受的盐”是指在药学上无毒的酸与本发明通式I所示的化合物的碱性部分反应形成的盐,包括例如盐酸盐、醋酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、碳酸盐、碳酸氢盐、亚硫酸盐、磷酸盐、磷酸氢盐、草酸盐、丙二酸盐、戊酸盐、硼酸盐、对甲苯磺酸盐、甲磺酸盐、酒石酸盐、苯甲酸盐、乳酸盐、柠檬酸盐、马来酸盐、富马酸盐、?#36824;?#37240;盐、水杨酸盐、扁桃酸盐、琥珀酸盐、葡萄糖酸盐、乳糖酸盐等。这种盐可以通过本领域技术人员公知的方法来制备。

          实验证明,本发明通式I所示的化合物能够与雄激素受体结合,具有显著的抵抗雄激素并且降解雄激素受体活性。所述化合物能够单独或作为组合物用于治疗各种与雄激素相关的疾病,包括例如前列腺癌、前列腺增生、乳腺癌、膀胱癌,还能用于粉刺、多毛、脱发等疾病的治疗。

          因此,本发明还提供含有所述通式I所示的化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物,和含有所述通式I所示的化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的载体的药物制剂。

          所述药学上可接受的载体可以包括本领域常规的药用载体,例如稀释剂、填充剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、溶剂、增溶剂等;包括但不限于例如淀粉、糖粉、磷酸钙、硬脂酸镁、滑石粉、糊精、纤维素及其衍生物、微晶纤维素、聚乙二?#32908;?#29983;理盐水、葡萄糖溶液等。

          本发明药物组合物和药物制剂也可以包括各种其它常用的添加剂,例如防腐剂、乳化剂、助悬剂、矫味剂等。

          本发明药物组合物可以制备成药学上可接受的任?#38382;实?#30340;?#21015;停?#21253;括但不限于例如片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒制剂、糖浆剂、注射剂、溶液剂、混悬剂等。

          本发明通式I所示的化合物或其药学上可接受的盐可以通过任何有效途径施用于哺乳动物,例如人,所述途径包括口服、静脉内、腹膜内、肌肉内、局部、透皮、经眼、经鼻、吸入、皮下、肌内、口含、舌下、?#32972;?#31561;。它们可以单独给药,或者与其他活性成分联合给药。本发明通式I化合物或其药学上可接受的盐的有效量可以由本领域技术人员例如主治医生等通过使用常规方法来确定。在确定本发明化合物的有效量时,许多因素应被主治医生考虑,包括但不限于;所要给与的具体化合物;与其它药剂的联合用药;哺乳动物的种类、大小、年龄和一般健康?#32431;觶?#30142;病的严重程度;个体患者的反应;给药方式;所给药的制剂的生物利用率特性;所选择的剂量方案;其它伴随药物的使用;以及其它相关的情况等。通常剂量为10-1000?#37327;恕?/p>

          具体实施方式

          下面用实施例进一步具体地描述本发明,显然,所描述的实施例仅是本发明的一部分,而不是全部。这些实施例仅用于例证本发明,不应将其理解为对本发明保护?#27573;?#30340;限制。基于本发明的实施例,本领域技术人员在没有付出创造性劳动前提下所获得的所有其它技术方案,都属于本发明保护的?#27573;А?/p>

          实施例中,缩写THF代表四氢呋喃、DMSO-d6代表氘代二甲基亚砜、DMSO代表二甲基亚砜、HPLC代表高效?#21512;?#33394;谱、EDCI代表[1-?#19968;?3-(3-二甲?#34987;?#19993;基)碳二亚胺](1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide)、DIPEA代表(N,N-二异丙基乙胺)(N,N-Diisopropylethylamine)、HOBT代表(羟基苯并三唑)(Hydroxybenzotriazole)、DMF代表二甲基甲酰胺。

          1H NMR测定用Bruker AVANCE II 400MHz核磁共振仪,其中s代表单峰、bs或brs代表宽单峰、d代表二重峰、m代表多重峰,Ar为芳基。质谱测定用Bruker amaZon SL质谱仪。高分辨质谱测定用Waters Acquity HPLC + Xeno G2-S TOF Mass。 高压?#21512;?#33394;谱测定用SHIMADZU CBM-20A。薄层层析测定用 Silica gel 60F254 Plates (Merck)。

          I.化合物制备实施例

          实施例1

          S)-5-乙酰基-N-(3-(4-氰基-3-三氟甲基-苯基)-?#34987;?2-羟基-2-甲基-3-氧代丙基)-1H-吡唑-3-羧酰胺 (C18H16F3N5O4) 的制备

          第一步反应

          把二氯亚砜(2.4毫升,33.6毫摩尔)逐滴加入到(R)-3-溴-2-羟基-2- 甲基丙酸(5.11克,28毫摩尔)在30毫升THF的溶液中,滴加的温度控制在0-12℃,用时10?#31181;印?#23558;所得的混合物在相同条件下搅拌2小时。内温调整到-5℃左右,向反应的混合物缓慢加入三?#19968;?#33018;(Et3N)(5.0毫升, 36.4 mmol, 1.3eq),加料过程中内温低于12℃。在相同的反应条件搅拌20?#31181;印?#38543;后向其中逐滴加入4–氰基-3-三氟甲基-苯胺(4.0克,21毫摩尔)在40 mL THF中的溶液,将所得混合物于50 ℃搅拌两个小时。反应液冷却至20 ± 5℃,?#32531;?#21152;入水(15毫升,2.9体积)和甲苯(20毫升,4.0体积),短暂搅拌后分液,有机相用水洗涤(15毫升,2.9体积),将有机相合并后通过减压蒸馏浓缩至5 ± 0.5体积(6.4重量),蒸馏过程中保?#27835;?#24230;低于50℃。浓缩液中加入甲苯(31毫升,6体积),稀释至5 ± 0.5体积(6.4重量),将温度调整到2.5 ± 2.5℃,在该温度下搅拌一小时,加入晶种(0.018克,0.005重量),继续搅拌一小时,过滤,滤饼用甲?#36739;?#20004;次(每次8.5毫升,每次1.7体积)。?#32531;?#23558;该批料在真空干燥箱干燥,得到5.8克(R)-3-溴-N-(4-氰基-3-三氟甲基-苯基)-2-羟基-2-甲基丙酰胺。产率59%, HPLC(流动相为水和乙氰) 纯度99%(220nm),99%(254nm),光学 HPLC 纯度99%。

          核磁共振谱:1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ10.52 (s, 1H, NH), 8.55(d, J=1.6Hz,1H, ArH), 8.31(dd, J=8.2Hz, J=1.6Hz, 1H, ArH), 8.11(d, J=8.2Hz, 1H, ArH), 6.40(s, 1H, OH), 3.84(d, J=10.4Hz, 1H, CH), 3.60(d, J=10.4Hz, 1H, CH), 1.50(s, 3H, CH3)。

          质谱:(ESI, Positive): 351.9[M+H]+

          第二步反应

          在250mL园底烧瓶中加入(R)-3-溴-N-(4-氰基-3-三氟甲基-苯基)-2-羟基-2-甲基丙酰胺(2.00克, 5.696毫摩尔),40mL无水DMSO作为溶剂,再加入叠氮钠(sodium azide)(1.84克, 0.02848摩尔),?#32531;?#23558;反应液在氩气保护下于室温搅拌3天。

          薄层色谱法(展开剂为?#21644;椋?#20057;酸乙酯 = 2:1)确定反应完成后,加入乙酸乙酯和水,二相分离,有机相用盐水洗涤、硫酸镁干燥、过滤、溶剂交换为甲醇,初产物(S)-3-叠氮基-N-(4-氰基-3-三氟甲基-苯基)-2-羟基-2-甲基丙酰胺直接用于下一步反应。

          核磁共振谱:1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ9.00(bs, 1H, NH), 8.08(s, 1H, ArH), 7.95(d, J=8.4 Hz, 1H, ArH), 7.81(d, J=8.4 Hz, 1H, ArH), 3.92 (d, J=12.4Hz, 1H, CH), 3.50 (d, J=12.4Hz, 1H, CH), 2.96 (s, 1H, OH), 1.54 (s, 3H, CH3)。

          质谱:(ESI, Negative): 312.18 [M-H]-; (ESI, Positive): 314.03 [M+H]+

          第三步反应

          将(S)-3-叠氮基-N-(4-氰基-3-三氟甲基-苯基)-2-羟基-2-甲基丙酰胺(1.78克,5.696毫摩尔)的甲醇(30mL)溶液用钯?#21363;?#21270;氢化 (30 psi),反应3-4 小时。

          薄层色谱法确定反应完成后,硅藻土过滤,抽干,得到黄色/淡棕色粉未物质,干燥,得(S)-3-?#34987;?N-(4-氰基-3-三氟甲基-苯基)-2-羟基-2-甲基丙酰胺1.57克,产率约为96%。

          核磁共振谱:1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ9.01(bs, 1H, NH), 8.10(s, 1H, ArH), 7.98(d, J=8.6Hz, 1H, ArH), 7.79(d, J=8.6Hz, 1H, ArH), 5.10(m, 2H, NH2), 4.12 (d, J=12.4Hz, 1H, CH), 3.75 (d, J=12.4Hz, 1H, CH), 3.02(s, 1H, OH), 1.51 (s, 3H, CH3)。

          质谱: (ESI, Positive):288.09 [M+H]+

          第四步反应

          在100mL园底烧瓶中加入5-乙酰基-1H-吡唑-3-羧酸(0.13克, 0.8355毫摩尔),2.0mL无水DMF作为溶剂,再加入EDCI (0.16克, 1.0444毫摩尔), DIPEA(0.18克, 1.3926毫摩尔)和HOBT (32?#37327;? 0.2098毫摩尔),将所得混合物搅拌20?#31181;印?#23558;另一原料 (S)-3-?#34987;?N-(4-氰基-3-三氟甲基-苯基)-2-羟基-2-甲基丙酰胺 (0.20克, 0.6963毫摩尔)溶解于5.0mL 无水DMF,加入上述混合物中,?#32531;?#21453;应液在氩气保护下于室温搅拌3天。

          薄层色谱法确定反应完成后,加入乙酸乙酯和水,二相分离,将有机相抽干,得到油状物质。硅胶柱层析分离(流动相为二氯甲烷:甲醇 = 9:1),纯化,得?#38477;?#40644;色粉未物质0.14克,产率约为50%。

          核磁共振谱:1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ14.19(s, 1H, 吡唑-NH), 10.53(s, 1H, NH), 8.50(s, 1H, ArH), 8.35(br s, 1H, NH), 8.26(d, J=8.8Hz, 1H, ArH), 8.09(d, J=8.8Hz, 1H, ArH), 7.37(s, 1H, 吡唑-H), 6.20(s, 1H, OH), 3.62-3.58(m, 2H, CH2), 1.99(s, 3H, CH3), 1.38(s, 3H, CH3)。

          质谱:(ESI, Negative): 422.16 [M-H]-

          实施例2

          N-(S)-(3-(4-氰基-3-三氟甲基-苯基)-?#34987;?2-羟基-2-甲基-3-氧代丙基)-5-(1-羟基?#19968;?1H-吡唑-3-羧酰胺的制备

          在100mL园底烧瓶中加入(S)-5-乙酰基-N-(3-(4-氰基-3-三氟甲基-苯基)-?#34987;?2-羟基-2-甲基-3-氧代丙基)-1H-吡唑-3-羧酰胺(0.10克, 0.2362毫摩尔),5 mL无水乙醇作为溶剂,向此反应液中缓慢加入硼氢化钠(sodium borohydride,22?#37327;耍?.5905mmol)和乙醇的悬浮液,?#32531;?#21453;应液在氩气保护下,室温中,搅拌过夜。

          薄层色谱法确定反应完成后,加入0.5mL水和1mL 0.5M HCl,短暂搅拌后减压蒸馏浓缩至干,?#32531;?#21152;二氯甲烷(20mL)溶解,有机相用NaHCO3水溶液、盐水洗涤、硫酸镁干燥、过滤、抽干得到油状物质。硅胶柱层析分离(流动相为二氯甲烷:甲醇 = 9:1),纯化,得?#38477;?#40644;色粉未物质76?#37327;耍?#20135;率约为76%。

          核磁共振谱:1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ13.56(s, 1H, 吡唑-NH), 10.52(s, 1H, NH), 8.49(s, 1H, ArH), 8.33(br s, 1H, NH), 8.25(d, J=8.8Hz, 1H, ArH), 8.09(d, J=8.8Hz, 1H, ArH), 7.31(s, 1H, 吡唑-H), 6.20(s, 1H, OH), 4.68-4.62(m, 1H, CH), 3.64-3.58(m, 3H, OH+CH2), 1.51(s, 3H, CH3), 1.38(s, 3H, CH3)。

          质谱: (ESI, negative) m/z 424.10 [M-H]-

          实施例3

          (S)-N-(3-(4-氰基-3-三氟甲基-苯基)-?#34987;?2-羟基-2-甲基-3-氧代丙基)-5-三氟甲基-1H-吡唑-3-羧酰胺 (C17H13F6N5O3) 的制备

          在100mL园底烧瓶中加入5-三氟甲基-1H吡唑-3-羧酸(0.23克, 1.253毫摩尔),2.3mL无水DMF作为溶剂,再加入EDCI (0.24克, 1.567毫摩尔), DIPEA(0.27克, 2.089毫摩尔)和HOBT (48?#37327;? 0.3133毫摩尔),搅拌20?#31181;印?#21152;入另一原料 (S)-3-?#34987;?N-(4-氰基-3-三氟甲基-苯基)-2-羟基-2-甲基丙酰胺 (0.30克, 1.044毫摩尔)在6.0mL 无水DMF中的溶液,?#32531;?#23558;反应液在氩气保护下于室温搅拌3天。

          薄层色谱法确定反应完成后,加入乙酸乙酯和水,二相分离,将有机相抽干,得到油状物质。硅胶柱层析分离(流动相为二氯甲烷:甲醇 = 9:1),纯化,得?#38477;?#40644;色粉未物质0.23克,产率约为50%。

          核磁共振谱:1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ14.41(s, 1H, 吡唑-NH), 10.50(s, 1H, NH), 8.58(s, 1H, NH), 8.48(s, 1H, ArH), 8.26(d, J=8.0Hz, 1H, ArH), 8.09(d, J=8.0Hz, 1H, ArH), 7.36(s, 1H, 吡唑-H), 6.12(s, 1H, OH), 3.67-3.45(m, 2H, CH2), 1.39(s, 3H, CH3)。

          质谱:(ESI, Negative): 448.00 [M-H]-

          实施例4

          (S)-5-氯-N-(3-(4-氰基-3-三氟甲基-苯基)-?#34987;?2-羟基-2-甲基-3-氧代丙基)-1H-吡唑-3-羧酰胺(C16H13ClF3N5O3)的制备

          在100mL园底烧瓶中加入5-氯-1H-吡唑-3-羧酸(0.122克, 0.8355毫摩尔),1.5mL无水DMF作为溶剂,再加入EDCI (0.16克, 1.0444毫摩尔),DIPEA(0.24mL, 1.3926毫摩尔)和HOBT (32?#37327;? 0.2089毫摩尔),搅拌20?#31181;印?#21152;入另一原料 (S)-3-?#34987;?N-(4-氰基-3-三氟甲基-苯基)-2-羟基-2-甲基丙酰胺 (0.20克, 0.6963毫摩尔)在4.0mL 无水DMF中的溶液,?#32531;?#23558;反应液在氩气保护下,于室温搅拌3天。

          薄层色谱法确定反应完成后,加入乙酸乙酯和水,二相分离,将有机相抽干,得到油状物质。硅胶柱层析分离(流动相为二氯甲烷:甲醇 = 9:1),纯化,得?#38477;?#40644;色粉未物质0.15克,产率约为51.0%。

          核磁共振谱:1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ13.79(s, 1H, NH), 10.50(s, 1H, NH), 8.50(s, 1H, ArH), 8.44(bs, 1H, NH), 8.25(d, J=8.2Hz, 1H, ArH), 8.10(d, J=8.2Hz, 1H, ArH), 6.93(s, 1H, 吡唑-H), 6.11(s, 1H, OH), 3.66-3.61(m, 1H, CH2), 3.54-3.50(m, 1H, CH2), 1.38(s, 3H, CH3)。

          质谱: (ESI, Negative) m/z 414.25 [M-H]-

          实施例5

          (S)-5-溴-N-(3-(4-氰基-3-三氟甲基-苯基)-?#34987;?2-羟基-2-甲基-3-氧代丙基)-1H-吡唑-3-羧酰胺 (C16H13BrF3N5O3) 的制备

          在100mL园底烧瓶中加入5-溴-1H-吡唑-3-羧酸(0.16克, 0.8355毫摩尔),1.5mL无水DMF作为溶剂,再加入EDCI (0.16克, 1.0444毫摩尔),DIPEA(0.24mL, 1.3926毫摩尔)和HOBT (32?#37327;? 0.2089毫摩尔),搅拌20?#31181;印?#21152;入另一原料 (S)-3-?#34987;?N-(4-氰基-3-三氟甲基-苯基)-2-羟基-2-甲基丙酰胺 (0.20克, 0.6963毫摩尔)在4.0mL 无水DMF中的溶液,?#32531;?#23558;反应液在氩气保护下,于室温搅拌3天。

          薄层色谱法确定反应完成后,加入乙酸乙酯和水,二相分离,将有机相抽干,得到油状物质。硅胶柱层析分离(流动相为二氯甲烷:甲醇 = 9:1),纯化,得?#38477;?#40644;色粉未物质0.176克,产率约为55.0%。

          核磁共振谱:1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ13.82(s, 1H, NH), 10.49(s, 1H, NH), 8.51(m, 2H), 8.27(d, J=8.2Hz, 1H, ArH), 8.08(d, J=8.2Hz, 1H, ArH), 7.38(s, 1H, 吡唑-H), 6.13(s, 1H, OH), 3.65-3.50(m, 2H, CH2), 1.39(s, 3H, CH3)。

          质谱: (ESI, Negative) m/z 457.97 [M-H]-

          实施例6

          (S)-N-(3-(4-氰基-3-三氟甲基-苯基)-?#34987;?2-羟基-2-甲基-3-氧代丙基)-5-硝基-1H-吡唑-3-羧酰胺 (C16H13F3N6O5) 的制备

          在100mL园底烧瓶中加入5-硝基-1H-吡唑-3-羧酸(0.13克, 0.8355毫摩尔),1.5mL无水DMF作为溶剂,再加入EDCI (0.16克, 1.0444毫摩尔), DIPEA(0.24mL, 1.3926毫摩尔)和HOBT (32?#37327;? 0.2089毫摩尔),搅拌20?#31181;印?#21152;入另一原料 (S)-3-?#34987;?N-(4-氰基-3-三氟甲基-苯基)-2-羟基-2-甲基丙酰胺 (0.20克, 0.6963毫摩尔)在4.0mL 无水DMF中的溶液,?#32531;?#23558;反应液在氩气保护下,于室温搅拌3天。

          薄层色谱法确定反应完成后,加入乙酸乙酯和水,二相分离,将有机相抽干,得到油状物质。硅胶柱层析分离(流动相为二氯甲烷:甲醇 = 9:1),纯化,得到黄色粉未物质0.14克,产率约为48.0%。

          核磁共振谱:1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ14.62(s, 1H, NH), 10.54(s, 1H, NH), 8.59(s, 1H, NH), 8.50(s, 1H, ArH), 8.27(d, J=8.8Hz, 1H, ArH), 8.09(d, J=8.8Hz, 1H, ArH), 7.41(s, 1H, 吡唑-H), 6.22(s, 1H, OH), 3.70-3.51(m, 2H, CH2), 1.39(s, 3H, CH3)。

          质谱: (ESI, Negative) m/z 425.03 [M-H]-

          实施例7

          (S)-5-氰基-N-(3-(4-氰基-3-三氟甲基-苯基)-?#34987;?2-羟基-2-甲基-3-氧代丙基)-1H-吡唑-3-羧酰胺 (C17H13F3N6O3) 的制备

          在100mL园底烧瓶中加入5-氰基-1H-吡唑-3-羧酸(0.115克, 0.8355毫摩尔) ,1.5mL无水DMF作为溶剂,再加入 EDCI (0.16克, 1.0444毫摩尔), DIPEA(0.24mL, 1.3926毫摩尔)和HOBT (32?#37327;? 0.2089毫摩尔),搅拌20?#31181;印?#21152;入另一原料 (S)-3-?#34987;?N-(4-氰基-3-三氟甲基-苯基)-2-羟基-2-甲基丙酰胺 (0.20克, 0.6963毫摩尔)在4.0mL 无水DMF中的溶液,?#32531;?#23558;反应液在氩气保护下,于室温搅拌3天。

          薄层色谱法确定反应完成后,加入乙酸乙酯和水,二相分离,将有机相抽干,得到油状物质。硅胶柱层析分离(流动相为二氯甲烷:甲醇 = 95:5),纯化,得?#38477;?#40644;色粉未物质得0.15克,产率约为54.0%。

          核磁共振谱:1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ14.53(s, 1H, NH), 10.52(s, 1H, NH), 8.58(s, 1H, NH), 8.49(s, 1H, ArH), 8.26(d, J=8.4Hz, 1H, ArH), 8.09(d, J=8.4Hz, 1H, ArH), 7.39(s, 1H, 吡唑-H), 6.19(s, 1H, OH), 3.68-3.52(m, 2H, CH2), 1.38(s, 3H, CH3)。

          质谱: (ESI, Negative) m/z 405.05 [M-H]-

          实施例8

          (S)-N-(3-(4-氰基-3-三氟甲基-苯基)-?#34987;?2-羟基-2-甲基-3-氧代丙基)-5-(4-氟苯基)-1H-吡唑-3-羧酰胺 (C22H17F4N5O3) 的制备

          在100mL园底烧瓶中加入5-(4-氟-苯基)-1H-吡唑-3-羧酸(0.17克, 0.8355毫摩尔),1.7mL无水DMF作为溶剂, 再加入EDCI (0.16克, 1.0444毫摩尔), DIPEA(0.24mL, 1.3926毫摩尔)和HOBT (32?#37327;? 0.2089毫摩尔),搅拌20?#31181;印?#21152;入另一原料 (S)-3-?#34987;?N-(4-氰基-3-三氟甲基-苯基)-2-羟基-2-甲基丙酰胺 (0.20克, 0.6963毫摩尔)在4.0mL 无水DMF中的溶液,?#32531;?#23558;反应液在氩气保护下,于室温搅拌3天。

          薄层色谱法确定反应完成后,加入乙酸乙酯和水,二相分离,将有机相抽干,得到油状物质。硅胶柱层析分离(流动相为二氯甲烷:甲醇 = 95:5),纯化,得?#38477;?#40644;色粉未物质得0.17克,产率约为50.0%。

          核磁共振谱:1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ14.20(s, 1H, NH), 10.51(s, 1H, NH), 8.52-8.50(m, 2H), 8.25(d, J=8.8Hz, 1H, ArH), 8.09(d, J=8.8Hz, 1H, ArH), 7.65-7.57(m, 2H, ArH), 7.36(s, 1H, 吡唑-H), 7.16-7.06(m, 2H, ArH), 6.15(s, 1H, OH), 3.66-3.53(m, 2H, CH2), 1.38(s, 3H, CH3)。

          质谱: (ESI, Negative) m/z 474.08 [M-H]-

          实施例9

          (S)-N-(3-(3-氯-4-氰基-苯基)-?#34987;?2-羟基-2-甲基-3-氧代丙基)-5-三氟甲基-1H-吡唑-3-羧酰胺(C16H13ClF3N5O3) 的制备

          第一步反应

          把二氯亚砜(2.38毫升,32.787毫摩尔)逐滴加入到(R)-3-溴-2-羟基-2-甲基丙酸(5.00克,27.322毫摩尔)在30毫升THF的溶液中,滴加的温度控制在0-12℃,用时10?#31181;印?#23558;所得的混合物在相同条件下搅拌2小时。内温调整到-5℃左右,向反应的混合物缓慢加入三?#19968;?#33018;(4.95毫升, 35.52 mmol, 1.3eq),加料过程中内温低于12℃。在相同的反应条件搅拌20?#31181;印?#38543;后向其中逐滴加入3 -氯-4–氰基-苯胺(3.96克,25.96毫摩尔)在40 mL THF中的溶液,将所得混合物于50℃搅拌两个小时。硅胶柱层析分离(流动相为?#21644;?乙酸乙酯 = 2:1),纯化,真空干燥箱干燥,得到7.30克(R)-3-溴-N-(3-氯-4-氰基-苯基)- 2-羟基-2-甲基丙酰胺。产率88.6%, HPLC 纯度99%(220nm),99%(254nm)。

          核磁共振谱:1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ10.22 (s, 1H, NH), 8.13(d, J=2.0Hz,1H, ArH), 7.88(dd, J=8.2Hz, J=2.0Hz, 1H, ArH), 7.80(d, J=8.2Hz, 1H, ArH), 6.20(s, 1H, OH), 3.94(d, J=10.4Hz, 1H, CH), 3.72(d, J=10.4Hz, 1H, CH), 1.48(s, 3H, CH3)。

          质谱:(ESI, Positive):351.99 [M+H]+

          第二步反应

          在250mL园底烧瓶中加入(R)-3-溴-N-(3-氯-4-氰基-苯基)- 2-羟基-2-甲基丙酰胺(2.00克, 6.278毫摩尔),加入40mL无水DMSO作为溶剂,再加入叠氮钠(sodium azide)(2.05克, 0.03149摩尔),?#32531;?#23558;反应液在氩气保护下,于80℃搅拌过夜。

          薄层色谱法确定反应完成后,加入乙酸乙酯和水,二相分离,将有机相用盐水洗涤、硫酸镁干燥、过滤、溶剂交换为甲醇,初产物 (S)-3-叠氮基-N-(3-氯-4-氰基-苯基)- 2-羟基-2-甲基丙酰胺直接用于下一步反应。

          核磁共振谱:1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ8.95(bs, 1H, NH), 8.03(s, 1H, ArH), 7.86(d, J=8.4 Hz, 1H, ArH), 7.74(d, J=8.4 Hz, 1H, ArH), 3.91(d, J=12.4 Hz, 1H, CH), 3.49(d, J=12.4 Hz, 1H, CH), 2.95(s, 1H, OH), 1.56(s, 3H, CH3)。

          质谱:(ESI, Negative): 278.42[M-H]-; (ESI, Positive): 280.03[M+H]+

          第三步反应

          将(S)-3-叠氮基-N-(3-氯-4-氰基-苯基)- 2-羟基-2-甲基丙酰胺(1.68克, 5.9739毫摩尔)的甲醇(30mL)溶液用钯?#21363;?#21270;氢化(30 psi),反应3-4 小时。

          薄层色谱法确定反应完成后,硅藻土过滤,抽干,得到黄色/淡棕色粉未状 (S)-3-?#34987;?N-(3-氯-4-氰基-苯基)- 2-羟基-2-甲基丙酰胺1.47克,产率约为97%。

          质谱: (ESI, Positive):254.03 [M+H]+

          第四步反应

          在100mL园底烧瓶中加入5-三氟甲基-1H-吡唑-3-羧酸(0.256克, 1.4191毫摩尔), 2.6mL无水DMF作为溶剂,再加入EDCI (0.275克, 1.7748毫摩尔), DIPEA(0.41mL, 2.365毫摩尔)和HOBT (54?#37327;? 0.3548毫摩尔),搅拌20?#31181;印?#21152;入另一原料 (S)-3-?#34987;?N-(3-氯-4-氰基-苯基)- 2-羟基-2-甲基丙酰胺(0.30克, 1.1826毫摩尔)在6.0mL 无水DMF中的溶液,?#32531;?#23558;反应液在氩气保护下,于室温搅拌3天。

          薄层色谱法(展开剂为二氯甲烷:甲醇 = 9:1)确定反应完成后,加入乙酸乙酯和水,二相分离,将有机相抽干,得到油状物质。硅胶柱层析分离(流动相为二氯甲烷:甲醇 = 9:1),纯化,得?#38477;?#40644;色粉未物质0.30克,产率约为61.0%。

          核磁共振谱:1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ14.40(s, 1H, NH), 10.42(s, 1H, NH), 8.49(s, 1H, NH), 8.11(d, J=1.6Hz, 1H, ArH), 7.86(d, J=8.8Hz, J=1.6Hz, 1H, ArH), 7.81(d, J=8.8Hz, 1H, ArH), 7.34(s, 1H, 吡唑-H), 6.10(s, 1H, OH), 3.65-3.51(m, 2H, CH2), 1.42(s, 3H, CH3)。

          质谱: (ESI, Negative) m/z 414.03 [M-H]-

          实施例10

          (S)-N-(3-(6-氰基-5-三氟甲基-吡啶-3-基)-?#34987;?2-羟基-2-甲基-3-氧代丙基)-5-三氟甲基-1H-吡唑-3-羧酰胺(C16H12F6N6O3) 的制备

          第一步反应

          把二氯亚砜(2.39毫升,32.79毫摩尔)逐滴加入到(R)-3 -溴-2-羟基-2-甲基丙酸(5.00克,27.322毫摩尔)在30毫升THF的溶液中,滴加的温度控制在0-12℃,用时10?#31181;印?#23558;所得的混合物在相同条件下搅拌2小时。内温调整到-5℃左右,向反应的混合物缓慢加入三?#19968;?#33018;(4.95毫升, 35.52 mmol, 1.3eq),加料过程中内温低于12℃。在相同的反应条件搅拌20?#31181;印?#38543;后向其中加入5-?#34987;?3-三氟甲基-2-氰基吡啶(4.86克,25.97毫摩尔)在40 mL THF中的溶液,将所得混合物于50℃搅拌两个小时。反应液冷却至20 ± 5℃,?#32531;?#21152;入水(15毫升,2.9体积)和乙酸乙酯(20毫升,4.0体积),短暂搅拌后分液,有机相用水洗涤(15毫升,2.9体积)一次,将有机相合并后通过减压蒸馏浓缩至干。将残留物用硅胶柱层析分离(流动相为?#21644;?乙酸乙酯 = 2:1),纯化,真空干燥箱干燥,得到7.77克 (R)-3-溴-N-(6-氰基-5-三氟甲基-吡啶-3-基)- 2-羟基-2-甲基丙酰胺。产率85%, HPLC 纯度99%(220nm),99%(254nm)。

          核磁共振谱:1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ10.82(s, 1H, NH), 9.41(d, J=2.0Hz, 1H, ArH), 8.90(d, J=2.0Hz, 1H, ArH), 6.51(s, 1H, OH), 3.84(d, J=10.4Hz, 1H, CH), 3.61(d, J=10.4Hz, 1H, CH), 1.50(s, 3H, CH3)。

          质谱:(ESI, Positive):351.9915 [M+H]+

          第二步反应

          在250mL园底烧瓶中加入(R)-3-溴-N-(6-氰基-5-三氟甲基-吡啶-3-基)- 2-羟基-2-甲基丙酰胺 (2.00克, 5.680毫摩尔),加入40mL无水DMSO作为溶剂,再加入叠氮钠(sodium azide)(1.85克, 0.0288摩尔),?#32531;?#21453;应液在氩气保护下,于80℃搅拌14小时。

          薄层色谱法确定反应完成后,加入乙酸乙酯和水并进行二相分离,将有机相用盐水洗涤、硫酸镁干燥、过滤、溶剂交换为甲醇,初产物(S)-3-叠氮基-N-(6-氰基-5-三氟甲基-吡啶-3-基)- 2-羟基-2-甲基丙酰胺直接用于下一步反应。

          核磁共振谱:1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ9.18(bs, 1H, NH), 8.92(s, 1H, ArH), 8.55(s, 1H, ArH), 3.94(d, J=12.4Hz, 1H, CH), 3.52(d, J=12.4Hz, 1H, CH), 2.97(s, 1H, OH), 1.55 (s, 3H, CH3)。

          质谱:(ESI, Negative): 313.16[M-H]-; (ESI, Positive): 315.04[M+H]+

          第三步反应

          将(S)-3-叠氮基-N-(6-氰基-5-三氟甲基-吡啶-3-基)- 2-羟基-2-甲基丙酰胺(1.78克, 5.6607毫摩尔)的甲醇(30mL)溶液用钯?#21363;?#21270;氢化 (30 psi),反应3-4 小时。

          薄层色谱法确定反应完成后,硅藻土过滤,抽干,干燥,得到黄色/淡棕色粉未状(S)-3-?#34987;?N-(6-氰基-5-三氟甲基-吡啶-3-基)- 2-羟基-2-甲基丙酰胺1.55克,产率约为95%。

          质谱: (ESI, Positive):289.09 [M+H]+

          第四步反应

          在100mL园底烧瓶中加入5-三氟甲基-1H-吡唑-3-羧酸(0.225克, 1.2490毫摩尔), 加入2.3mL无水DMF作为溶剂,再加入EDCI (0.24克, 1.5612毫摩尔), DIPEA(0.26mL, 2.0817毫摩尔)和HOBT (48?#37327;? 0.3123毫摩尔) ,搅拌20?#31181;印?#21152;入另一原料(S)-3-?#34987;?N-(6-氰基-5-三氟甲基-吡啶-3-基)- 2-羟基-2-甲基丙酰胺 (0.30克, 1.0408毫摩尔)在6.0mL 无水DMF中的溶液,?#32531;?#23558;反应液在氩气保护下,于室温搅拌3天。

          薄层色谱法确定反应完成后,加入乙酸乙酯和水,二相分离,将有机相抽干,得到油状物质。硅胶柱层析分离(流动相为二氯甲烷:甲醇 = 7:1),纯化,得?#38477;?#40644;色粉未物质0.28克,产率约为60.0%。

          核磁共振谱:1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ14.42(s, 1H, NH), 10.73(s, 1H, NH), 9.32(s, 1H, ArH), 8.82(s, 1H, ArH), 8.60(s, 1H, NH), 7.39(s, 1H, 吡唑-H), 6.41(s, 1H, OH), 3.69-3.55(m, 2H, CH2), 1.39(s, 3H, CH3)。

          质谱: (ESI, Negative) m/z 449.05 [M-H]-

          实施例11

          (S)-N-(3-(6-氰基-吡啶-3-基)-?#34987;?2-羟基-2-甲基-3-氧代丙基)-5-三氟甲基-1H-吡唑-3-羧酰胺 (C15H13F3N6O3) 的制备

          第一步反应

          把二氯亚砜(2.39毫升,32.79毫摩尔)逐滴加入到(R)-3 -溴-2-羟基-2-甲基丙酸(5.00克,27.322毫摩尔)在30毫升THF的溶液中,滴加的温度控制在0-12℃,用时10?#31181;印?#23558;所得的混合物在相同条件下搅拌2小时。内温调整到-5℃左右,向反应混合物缓慢加入Et3N(4.95毫升, 35.52 mmol, 1.3eq),加料过程中内温低于12℃。在相同的反应条件搅拌20?#31181;印?#38543;后向其中逐滴加入5-?#34987;?2-氰基吡啶(3.09克,25.96毫摩尔)在40 mL THF中的溶液,将所得混合物于50℃搅拌两个小时。反应液冷却至20 ± 5℃,?#32531;?#21152;入水(15毫升,2.9体积)和乙酸乙酯(20毫升,4.0体积),短暂搅拌后分液,有机相用水洗涤(15毫升,2.9体积)一次,将有机相合并后通过减压蒸馏浓缩至干。硅胶柱层析分离(流动相为二氯甲烷:甲醇 = 19:1),纯化,真空干燥箱干燥,得到6.64克 (R)-3-溴-N-(6-氰基-吡啶-3-基)- 2-羟基-2-甲基丙酰胺。产率85%, HPLC 纯度99%(220nm), 99%(254nm)。

          核磁共振谱:1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.42(s, 1H, NH), 9.12(d, J=2.4Hz, 1H, ArH), 8.44(dd, J=8.8Hz, J=2.4Hz, 1H, ArH), 8.00(d, J=8.8Hz, 1H, ArH), 6.40(s, 1H, OH), 3.83(d, J=10.4Hz, 1H, CH), 3.59(d, J=10.4Hz, 1H, CH), 1.49(s, 3H, CH3)。

          质谱:(ESI, Positive): 284.0042 [M+H]+

          第二步反应

          在250mL园底烧瓶中加入(R)-3-溴-N-(6-氰基-吡啶-3-基)- 2-羟基-2-甲基丙酰胺(2.00克, 7.0395毫摩尔),40mL无水DMSO作为溶剂,再加入叠氮钠(sodium azide)(2.29克, 0.035198摩尔),?#32531;?#23558;反应液在氩气保护下,于80℃搅拌过夜。

          薄层色谱法确定反应完成后,加入乙酸乙酯和水,二相分离,有机相用盐水洗涤、硫酸镁干燥、过滤、溶剂交换为甲醇,初产物(S)-3-叠氮基-N-(6-氰基-吡啶-3-基)- 2-羟基-2-甲基丙酰胺直接用于下一步反应。

          核磁共振谱:1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ8.98(bs, 1H, NH), 8.77(d, J=2.0Hz,1H, ArH), 8.45(dd, J=8.6Hz, 1H, ArH), 7.79(d, J=8.6Hz, 1H, ArH), 3.93(d, J=12.4Hz, 1H, CH), 3.51(d, J=12.4Hz, 1H, CH), 2.98(s, 1H, OH), 1.55 (s, 3H, CH3)。

          质谱:(ESI, Negative): 245.17[M-H]-; (ESI, Positive): 247.05[M+H]+

          第三步反应

          将(S)-3-叠氮基-N-(6-氰基-吡啶-3-基)- 2-羟基-2-甲基丙酰胺(1.73克, 7.0262毫摩尔)的甲醇(30mL)溶液用钯?#21363;?#21270;氢化 (30 psi),反应3-4 小时。

          薄层色谱法确定反应完成后,硅藻土过滤,抽干,干燥后得到黄色/淡棕色粉未状(S)-3-?#34987;?N-(6-氰基-吡啶-3-基)- 2-羟基-2-甲基丙酰胺1.47克,产率约为95%。

          质谱: (ESI, Positive):221.09 [M+H]+

          第四步反应

          在100mL园底烧瓶中加入5-三氟甲基-1H-吡唑-3-羧酸(0.294克, 1.6347毫摩尔), 加入3.0mL无水DMF作为溶剂,再加入EDCI (0.32克, 2.0433毫摩尔),DIPEA(0.48mL, 2.7244毫摩尔)和HOBT (63?#37327;? 0.4087毫摩尔),搅拌20?#31181;印?#21152;入另一原料 (S)-3-?#34987;?N-(6-氰基-吡啶-3-基)- 2-羟基-2-甲基丙酰胺 (0.30克, 1.622毫摩尔)在6.0mL 无水DMF中的溶液,?#32531;?#23558;反应液在氩气保护下,于室温搅拌3天。

          薄层色谱法确定反应完成后,加入乙酸乙酯和水,二相分离,将有机相抽干,得到油状物质。硅胶柱层析分离(流动相为二氯甲烷:甲醇 = 7:1),纯化,烘干,得?#38477;?#40644;色粉未状目标化合物0.21克,产率约为41.0%。

          核磁共振谱:1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ14.45(s, 1H, NH), 10.54(s, 1H, NH), 9.31(d, J=2.4Hz, 1H, ArH), 8.50-8.47(m, 2H), 8.05(d, J=8.8Hz, 1H, ArH), 7.36(s, 1H, 吡唑-H), 6.13(s, 1H, OH), 3.68-3.49(m, 2H, CH2), 1.39(s, 3H, CH3)。

          质谱: (ESI, Negative) m/z 381.02 [M-H]-

          实施例12

          (S)-N-(3-(4-氰基-3-三氟甲基-苯基)-?#34987;?2-羟基-2-甲基-3-氧代丙基)-4-氟苯甲酰胺(C19H15F4N3O3) 的制备

          在100mL园底烧瓶中加入原料(S)-3-?#34987;?N-(4-氰基-3-三氟甲基-苯基)-2-羟基-2-甲基丙酰胺 (0.22克, 0.7659毫摩尔),无水THF 10mL作为溶剂,氩气保护,温度?#25269;?℃,加入4-氟苯甲酰氯 (0.14mL, 1.1489毫摩尔, 1.5equ),搅拌10?#31181;櫻?#20877;滴加三?#19968;?#33018;(Et3N, 0.32mL, 2.2977毫摩尔, 3equ),温度升至室温,搅拌,反应时间5-6小时。

          薄层色谱法确定反应完成后,加入乙酸乙酯和水,二相分离,将有机相抽干,得到油状物质。硅胶柱层析分离(流动相为二氯甲烷:乙酸乙酯 = 19:1),纯化,烘干,得到类白色粉未状目标化合物0.16克,产率约为50%。

          核磁共振谱:1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ10.52(s, 1H, NH), 8.50-8.48(m, 2H, NH+ArH), 8.25(d, J=8.2Hz, 1H, ArH), 8.09(d, J=8.2Hz, 1H, ArH), 7.91-7.87(m, 2H, ArH), 7.30-7.26(m, 2H, ArH), 6.19(s, 1H, OH), 3.66-3.54(m, 2H, CH2), 1.38(s, 3H, CH3)。

          质谱: (ESI, Negative) m/z 408.06 [M-H]-

          实施例13

          (S)-N-(3-(4-氰基-3-三氟甲基-苯基)-?#34987;?2-羟基-2-甲基-3-氧代丙基)-4-(三氟甲基)-苯甲酰胺(C20H15F6N3O3) 的制备

          在100mL园底烧瓶中加入原料(S)-3-?#34987;?N-(4-氰基-3-三氟甲基-苯基)-2-羟基-2-甲基丙酰胺 (0.25克, 0.8704毫摩尔),加入无水THF 10mL作为溶剂,氩气保护,温度?#25269;?℃,加入4-(三氟甲基)-苯甲酰氯 (0.55mL, 1.0444毫摩尔, 1.2当量),搅拌10?#31181;櫻?#20877;滴加三?#19968;?#33018;(Et3N, 0.24mL, 1.7408毫摩尔, 2.0当量),温度升至室温,搅拌,反应时间5-6小时。

          薄层色谱法确定反应完成后,加水终止反应,加入乙酸乙酯和水,二相分离,将有机相抽干,得到油状物质。将其用硅胶柱层析分离(流动相为二氯甲烷:乙酸乙酯 = 9:1),纯化,烘干,得到0.29克类白色粉未状目标化合物,产率约为72%。

          核磁共振谱:1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ10.54(s, 1H, NH), 8.52-8.48(m, 2H, NH+ArH), 8.26(d, J=8.4Hz, 1H, ArH), 8.14(d, J=8.4Hz, 1H, ArH), 8.01-7.97(m, 2H, ArH), 7.54-7.50(m, 2H, ArH), 6.21(s, 1H, OH), 3.70-3.58(m, 2H, CH2), 1.39(s, 3H, CH3)。

          质谱: (ESI, Negative) m/z 458.02 [M-H]-

          实施例14

          (S)-N1-(3-(4-氰基-3-三氟甲基-苯基)-?#34987;?2-羟基-2-甲基-3-氧代丙基)-N4-甲基-对苯二甲酰胺(C21H19F3N4O4) 的制备

          在100mL园底烧瓶中加入N-甲基-对苯二甲酸单酰胺(N-Methyl-terephthalamic acid)(0.21克, 1.0444毫摩尔),EDCI (0.20克, 1.3055毫摩尔),HOBT (40?#37327;? 0.2611毫摩尔),DIPEA(0.30mL, 1.7401毫摩尔),并加入2.0mL无水DMF作为溶剂,搅拌20?#31181;印?#23558;另一原料 (S)-3-?#34987;?N-(4-氰基-3-三氟甲基-苯基)-2-羟基-2-甲基丙酰胺 (0.25克, 0.8704毫摩尔)在5.0mL 无水DMF中的溶液加入其中,?#32531;?#23558;反应液在氩气保护下,于室温搅拌3天。

          薄层色谱法确定反应完成后,加入乙酸乙酯和水,二相分离,将有机相抽干,得到油状物质。将其用硅胶柱层析分离(流动相为二氯甲烷:乙酸乙酯 = 9:1),纯化,烘干,得到0.18克类白色粉未状目标化合物,产率约为46%。

          核磁共振谱:1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ10.49(s, 1H, NH), 8.48-8.45(m, 2H, NH+ArH), 8.21(d, J=8.4Hz, 1H, ArH), 8.06(d, J=8.4Hz, 1H, ArH), 7.87-7.83(m, 2H, ArH), 7.31-7.24(m, 2H, ArH), 6.17(s, 1H, OH), 3.64-3.51(m, 2H, CH2), 1.37(s, 3H, CH3)。

          质谱: (ESI, Negative) m/z 447.09 [M-H]-

          实施例15

          (S)-4-乙酰基-N-(3-(4-氰基-3-三氟甲基-苯基)-?#34987;?2-羟基-2-甲基-3-氧代丙基)-3-氟-苯甲酰胺(C21H17F4N3O4) 的制备

          在100mL园底烧瓶中加入4-乙酰基--3-氟-苯甲酸(0.19克, 1.0444毫摩尔),EDCI (0.20克, 1.055毫摩尔),HOBT (40?#37327;? 0.2611毫摩尔),DIPEA(0.30mL, 1.7401毫摩尔),并加入2.0mL无水DMF作为溶剂,搅拌20?#31181;印?#21521;其中加入另一原料 (S)-3-?#34987;?N-(4-氰基-3-三氟甲基-苯基)-2-羟基-2-甲基丙酰胺 (0.25克, 0.8704毫摩尔)溶解于5.0mL 无水DMF中的溶液,?#32531;?#23558;反应液在氩气保护下,于室温搅拌3天。

          薄层色谱法确定反应完成后,加入乙酸乙酯和水,二相分离,将有机相抽干,得到油状物质。将其用硅胶柱层析分离(流动相为二氯甲烷:乙酸乙酯= 9:1),纯化,烘干,得到0.18?#35828;?#40644;色粉未状目标化合物,产率约为46%。

          核磁共振谱:1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ10.53(s, 1H, NH), 8.51-8.47(m, 2H, NH+ArH), 8.27(d, J=8.6Hz, 1H, ArH), 8.10(d, J=8.6Hz, 1H, ArH), 8.01-7.96(m, 2H, ArH), 7.42(d, J=2.0Hz, 1H, ArH), 6.22(s, 1H, OH), 3.71-3.59(m, 2H, CH2), 1.41(s, 3H, CH3)。

          质谱: (ESI, Negative) m/z 450.07 [M-H]-

          实施例16

          (S)-N-(3-(6-氰基-5-三氟甲基-吡啶-3-基)-?#34987;?2-羟基-2-甲基-3-氧代丙基)-4-氟苯甲酰胺(C18H14F4N4O3) 的制备

          在100mL园底烧瓶中加入原料(S)-3-?#34987;?N-(6-氰基-5-三氟甲基-吡啶-3-基)-2-羟基-2-甲基丙酰胺(0.20克, 0.6939毫摩尔),并加入无水THF 10mL作为溶剂,氩气保护,温度?#25269;?℃,加入4-氟苯甲酰氯 (0.10mL, 1.3878毫摩尔, 1.2当量),搅拌10?#31181;櫻?#20877;滴加三?#19968;?#33018;(Et3N, 0.19mL, 1.3878毫摩尔, 2.0当量),温度升至室温,搅拌,反应时间5-6小时。

          薄层色谱法确定反应完成后,加水终止反应,加入乙酸乙酯和水,二相分离,将有机相抽干,得到油状物质。将其用硅胶柱层析分离(流动相为二氯甲烷:甲醇 = 95:5),纯化,烘干,得到0.21克类白色粉未状目标化合物,产率约为75%。

          核磁共振谱:1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ10.52(s, 1H, NH), 9.31(s, 1H, ArH), 8.80(s, 1H, ArH), 8.50-8.48(m, 1H, NH), 7.91-7.86(m, 2H, ArH), 7.31-7.26(m, 2H, ArH), 6.19(s, 1H, OH), 3.67-3.53(m, 2H, CH2), 1.38(s, 3H, CH3)。

          质谱: (ESI, Negative) m/z 409.05 [M-H]-

          II.制剂制备实施例

          制剂实施例A:注射剂的制备

          (一)制剂组成:

          实施例3化合物 25g

          聚山梨酯80 20g

          甘露醇 10g

          注射用水至 5000ml

          (二)制备方法:

          按处方组成,将实施例3化合物、聚山梨酯80和甘露醇,加到4000 m1注射用水中,搅拌溶解后,加注射用水至全量5000m1,继续搅拌,通过0.22um微孔?#22235;?#36827;行除菌过滤,滤液以每支5m1无菌?#22055;?#20110;5ml安瓶中(规格20mg/支),封口,灭菌。

          制剂实施例B:片剂的制备

          (一)处方组成

          处方2-1 通式I化合物片剂处方(每1000片用量)

          处方2-2 通式I化合物片剂处方(每1000片用量)

          处方2-3 通式I化合物片剂处方(每1000片用量)

          (二)制备工艺

          按实施例3片剂处方比例,将实施例3、乳糖及微晶纤维素按200:100:40比例微粉化,按处方比例加入过80?#21487;?#30340;微晶纤维素、预胶化淀粉、微粉硅胶及羧甲基淀粉钠混合均匀后,加入0.3%HPMC溶液适量,制软材,18?#21487;?#21046;粒,60℃干燥(控制颗粒水分含量在3%左右),加入过80?#21487;?#30340;硬脂酸镁与颗粒混匀,16?#21487;?#25972;粒,压片,包装。

          III.生物活性检测

          试剂与仪器设备:带有放射性标记的二氢?#21644;―HT-d3)和未标记的二氢?#21644;―HT)购于 Sigma-Aldrich(St. Louis, MO)。?#20102;?#28082;(scintillation solution) 购于 Perkin Elmer Life Sciences (Boston, MA)。羟磷灰石(HAP)悬浮液购于 Bio-Rad Laboratories (Hercules, CA)。缓冲液 (含有10 mM Tris, 1.5 mM EDTA二钠, 0.25 M 蔗糖, 10 mM 钼酸钠, 和1 mM PMSF ?#32531;髉H 调至7.4)。羟磷灰石(HAP)洗液(含有50 mM Tris 和1 mM KH2PO4?#32531;髉H 调至7.4)。

          在本发明中,通式I所示的芳香酰胺化合物生物活性按照下述方法检测。将制备实施例所得到的一些本发明化合物和对照化合物溶于DMSO 中,配制成一定浓度的母液,以DMSO将其稀释成几个浓度梯度,再用缓冲?#33322;?#21508;浓度进行稀释(10-1 nM 至 104 nM),4℃冰箱保存直至使用。将雄激素受体(制备于雄性SD大鼠的前列腺,雄性Sprague-Dawley大鼠 200-250克)和带有放射性标记的二氢?#21644;―HT-d3,84 Ci/mmol)加入到缓冲液中,混和均匀,配制成反应液,将各化合物浓度梯度稀释液分别加入到反应液中,混和均匀,4℃孵育15小时,使化合物及二氢?#21644;?#19982;雄激素受体充分反应,加入羟磷灰石(HAP)悬浮液,混和均匀,4℃孵育10?#31181;櫻?#31163;心,弃去含有游离二氢?#21644;?#30340;上清液。与雄激素受体结合的二氢?#21644;?#36890;过吸附于羟磷灰石上而保留在沉淀颗粒中,从而达到分离结合与未结合的放射性标记的配体的目的。向沉淀中加入?#20102;?#28082;(scintillation solution),混和均匀,WALLACE MicroBeta Trilux 液闪仪(Perkin Elmer)进行放射性强度检测。根据检测到的各浓度梯度的放射性强度数值进行数据处理,得到IC50 和 Ki值。具体的生物活性(雄激素受体配体放射性配体竞争结果)见下表:

          上表中的生物活性测定结果表明, 与阳性对照组(比卡鲁胺,和恩杂鲁胺)比较, 本发明化合物能够更强地与雄激素受体结合,具有更强地抵抗雄激素受体活性。因此,能够开发成比现有药物更安全、有效的、新型芳香酰胺类抗雄激素药物,并在治疗与雄激素相关疾病的研究中具有重要的价值和地位。

          本发明化合物能够单独或作为组合物用于治疗各种与雄激素相关的疾病,如前列腺癌、前列腺增生、乳腺癌、膀胱癌,还能用于粉刺、多毛、脱发等疾病的治疗。

          以上所述仅为本发明的实施例,并?#19988;?#27492;限制本发明的?#27573;В?#20961;是利用本说明书内容所作的等效结构或等效流程变换,或直接或间接运用在其它相关的技术领域,均同理包括在本发明的?#27573;?#20869;。

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