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        1. 一類芳香酰胺化合物及其制備方法和用途與流程

          文檔序號:15511012發布日期:2018-09-22 00:15

          本發明涉及一類芳香酰胺化合物及其制備方法以及其作為藥物的應用,所述化合物具有抵抗雄激素并且降解雄激素受體的作用,可用于前列腺癌、前列腺增生、乳腺癌、膀胱癌、粉刺、多毛、脫發等與雄激素相關的疾病治療。



          背景技術:

          雄激素受體屬于核受體家族,是由配體誘導的核轉錄因子的受體。雄激素受體是一種重要的細胞調節蛋白,它通過內源性雄激素在一系列的生理過程中起著重要的作用,包括男性第二性征發育和維護,包括肌肉和骨骼的質量,男性毛發,前列腺的生長,精子發育等。內源性甾體雄激素被稱為男性性激素,包括睪酮和二氫睪酮(DHT)。睪酮是在男性血清中發現的主要的甾體雄激素,它主要由睪丸分泌的。在許多外周組織,如前列腺和皮膚,睪酮可被5α-還原酶轉化為活性更強的雄激素二氫睪酮(DHT)。

          許多疾病和雄激素水平有關。男性隨著年齡的增長,體內雄激素水平會逐漸下降,伴隨著肌肉減少、骨質疏松、性功能下降等。相反,體內雄激素水平過高也會引起一些疾病,如前列腺癌、前列腺增生、粉刺、多毛、脫發等與雄激素相關的疾病。

          前列腺癌是激素依賴性的,因此前列腺癌的內分泌治療是最久使用、最成熟,也是最有效的手段。早在1941年,Huggins和Hodges發現了手術去勢,如手術切掉雙側睪丸以消除睪酮來源,和雌激素可延緩轉移性前列腺癌的進展,并首次證實了前列腺癌對雄激素去除的反應性。但是臨床研究表明,單純切掉睪丸可以降低血液中雄激素的含量,但并不能大幅度的降低前列腺組織中雄激素的含量,因為前列腺組織中存在利用腎上腺分泌的甾體為原料合成雄激素的酶系統,并可轉化雄激素睪酮為活性更強的雄激素二氫睪酮。因此,即使采取了去勢療法,對于前列腺癌,抗雄激素藥物治療也是必須的。

          應用抗雄激素藥物(雄激素拮抗劑)競爭性阻斷雄激素與前列腺細胞上雄激素受體的結合,是目前治療前列腺癌的標準治療方法。常用非甾體雄激素受體拮抗劑有氟他胺(Flutamide)、比卡魯胺(Bicalutumide)和恩雜魯胺(Enzalutamide,商品名:Xtandi)。

          氟他胺(Flutamide)是第一代非甾體雄激素受體拮抗劑 (Endocrinology 1972, 91, 427–437;Biochemical Society Transactions 1979, 7, 565–569;Journal of Steroid Biochemistry 1975, 6, 815–819),其代謝產物2一羥基氟他胺是其主要活性形式,能在靶組織內與雄激素受體結合,阻斷二氫睪丸素與雄激素受體結合,抑制靶組織攝取睪丸素,從而起到抗雄激素作用。因服用量較大,長期服用會造成男子乳房發育,伴有腫瘤和壓痛,并有惡心、嘔吐、腹瀉、偶爾出現皮膚反應,變性紅血蛋白性貧血,白細胞及血小板減少。另外,氟他胺在治療中易產生抗雄激素撤除綜合癥,少數病人有肝毒性等問題。

          比卡魯胺(Bicalutumide)是第二代非甾體雄激素受體拮抗劑 (The Journal of Endocrinology 1987, 113, R7–R9;Urologic Clinics of North America 1991, 18, 99–110)。此藥物是一個消旋異構體,其活性成分為左旋異構體。比卡魯胺除具有抗雄激素作用外,療效高于氟他胺,而副作用減少了70%。與氟他胺類似,能在靶組織內與雄激素受體結合,阻斷二氫睪丸素與雄激素受體結合,抑制靶組織攝取睪丸素,從而起到抗雄激素作用。其缺點是,經過一定中位期(一般18~24個月)后,幾乎所有患者最終都會發展為激素抵抗性前列腺癌。另外,比卡魯胺在治療中也產生抗雄激素撤除綜合癥等問題。

          恩雜魯胺(Enzalutamide,商品名:Xtandi),是第三代非甾體雄激素受體拮抗劑(Archives of Pharmacal Research 2015,38(11): 2076–82),美國FDA 于2012年批準該藥上市。是更強的雄激素受體拮抗,為內分泌治療增添了新的藥物。缺點是價格昂貴,并且也會發展為激素抵抗性前列腺癌。另外,恩雜魯胺在治療中發現能引起患者抽搐的副作用,因此其應用受到一定限制。

          因此,開發比現有藥物更安全有效的新型抗雄激素藥物在治療與雄激素相關疾病的研究中具有重要的價值和地位。



          技術實現要素:

          本發明的目的在于發現一種新型的安全有效的抗雄激素藥物。

          本發明人為了實現上述目的進行了深入地研究,結果發現:具有特定結構的芳香酰胺類化合物具有抵抗雄激素活性并具有可降解雄激素受體作用、與現有藥物相比更為安全有效,由此完成了本發明。

          即,本發明提供以下通式I所示的芳香酰胺化合物或其藥學上可接受的鹽(以下亦稱為本發明化合物),其是比現有藥物更安全有效的新的具有抵抗雄激素活性且具有可降解雄激素受體作用的一類化合物,可用于治療與雄激素相關的疾病,如前列腺癌、前列腺增生、乳腺癌、膀胱癌、粉刺、多毛、脫發等。

          其中R1和R2各自獨立地為氫原子、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6環烷基、氰基、硝基、鹵素或氨基,所述C1-6烷基、C1-6烷氧基、C2-6烯基、C2-6炔基和C3-6環烷基任選地被1個以上的鹵素原子取代;

          R3和R4各自獨立地為氫原子、羥基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C2-6烯基、C2-6炔基或C3-6環烷基;

          R5和R6各自獨立地為氫原子、鹵素、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6環烷基、氰基、硝基、氨基、C1-6烷基羰基、羥基C1-6烷基、C1-6烷基-NH-C(=O)-或芳基,所述C1-6烷基、C1-6烷氧基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6環烷基和芳基任選地被選自C1-6烷基、鹵素、氰基、硝基中的1個以上的取代基取代;

          X為碳原子或氮原子;和

          Y和Q各自獨立地為碳原子、氮原子、氧原子,或硫原子;n為2或3。

          在本發明的較佳實施方案中,R1和R2各自獨立地為氫原子、任選地被1個以上的鹵素原子取代的C1-6烷基、氰基、硝基、鹵素或氨基,更優選R1和R2各自獨立地為氫原子、氰基、硝基、鹵素或被1~3個鹵素原子取代的C1-4烷基,其中所述被1~3個鹵素原子取代的C1-4烷基優選是被1~3個氟原子取代的C1-4烷基,更優選是被1~3個氟原子取代的甲基,特別優選是三氟甲基。

          在本發明的較佳實施方案中,R3和R4各自獨立地為氫原子、羥基、或C1-6烷基,更優選R3和R4各自獨立地為氫原子、羥基、或C1-4烷基,特別優選R3和R4各自獨立地為羥基或甲基。

          在本發明的較佳實施方案中,R5和R6各自獨立地為氫原子、鹵素、任選地被1個以上的鹵素原子取代的C1-6烷基、氰基、硝基、C1-4烷基羰基、羥基C1-4烷基、C1-4烷基-NH-C(=O)-或芳基;

          優選R5和R6各自獨立地為氫原子、鹵素、被1~3個鹵素原子取代的C1-4烷基、氰基、硝基、C1-4烷基羰基、1-羥基乙基、N-甲基氨基甲酰基或芳基。其中所述被1~3個鹵素原子取代的C1-4烷基優選是被1~3個氟原子取代的C1-4烷基,更優選是被1~3個氟原子取代的甲基,特別優選是三氟甲基,所述C1-4烷基羰基優選是乙酰基。

          在本發明的較佳實施方案中,Y和Q各自獨立地為碳原子、或氮原子;優選Y和Q均為碳原子或氮原子。

          在本發明的較佳實施方案中,本發明的芳香酰胺化合物具有以下通式II所示的結構:

          其中,R1、R2、R3、R4、R5、R6和X的含義分別與上述的定義相同。

          在本發明的較佳實施方案中,本發明的芳香酰胺化合物具有以下通式III所示的結構:

          其中,R1、R2、R3、R4、R5、R6和X的含義分別與上述的定義相同。

          在上述通式I、II和III分子中有手性原子,在本發明中本發明化合物可為消旋體、左旋(R構型)和/或右旋(S構型)。因此,本發明還包括通式I所示的芳香酰胺化合物或其藥學上可接受的鹽的立體異構體,即它們的左旋、右旋和/或消旋體。

          在本發明的較佳實施方案中,本發明通式I所示的化合物優選為下列芳香酰胺化合物及其藥學上可接受的鹽:

          本發明還包括通式I所示的芳香酰胺化合物、其藥學上可接受的鹽或其立體異構體的水合物、體內一級和/或二級代謝物及前藥。

          作為體內一級代謝物的例子,例如可以列舉:

          通式I所示的芳香酰胺化合物           體內一級代謝物

          通式I所示的芳香酰胺化合物          體內一級代謝物

          通式I所示的芳香酰胺化合物           體內一級代謝物

          通式I所示的芳香酰胺化合物           體內一級代謝物。

          作為體內二級代謝物的例子,例如可以列舉:

          作為體內一級加二級代謝物的例子,例如可以列舉:

          作為前藥的例子,例如可以列舉:

          本發明的另一個目的是提供所述通式I所示的芳香酰胺化合物的制備方法,其特征在于,包括以下步驟:化合物IV和化合物V(均可直接商購或分別按文獻Tetrahedron 1979, 2337-2343和Tetrahedron 1979, 2345-2352方法合成)反應得到化合物VI,再與疊氮化合物,如疊氮鈉(NaN3)反應轉化為化合物VII。化合物VII被催化氫化還原為化合物VIII。化合物VIII和化合物IX在EDCI([1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳二亞胺](1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide))和HOBt(羥基苯并三唑(Hydroxybenzotriazole))的存在下(IX為酸時)或在堿性條件下(IX為酰氯時)反應生成結構通式I所示的目標化合物,其化學反應式如下:

          相應的手性化合物的制備可先商購或制備光學純的起始化合物X或XV(按文獻Tetrahedron 1979, 2337-2343, Tetrahedron 1979, 2345-2352方法合成), 再按以下所述路線合成目標化合物, 例如合成S構型的目標化合物(XIV):

          再如合成R構型的目標化合物(XIX):

          其中化學反應式中所示的R1、R2、R5、R6、X、Y、Q和n的定義與通式I中所述的R1、R2、R5、R6、X、Y、Q和n的定義相同。

          本發明所涉及的一些通式I所示的化合物(其中R3為甲基,R4為羥基)也可按以下路線合成:化合物XX與過氧乙酸、三氟過氧乙酸、過氧化氫、過氧苯甲酸等過氧化物(作為氧化劑)反應轉化為環氧化合物XXI, 再與疊氮化合物,如疊氮鈉(NaN3)反應轉化為化合物XXII。然后化合物XXII被催化氫化還原為化合物XXIII。化合物XXIII和化合物IX在EDCI和HOBt存在的下(IX為酸時)或在堿性條件下(IX為酰氯時)反應生成化合物XXIV。

          其中化學反應式中所示的R1、R2、R5、R6、X、Y、Q和n的定義與上述的通式I中的相同。

          其中,“”表示化合物IX為(酸)或(酰氯)。

          本發明的再一個目的是提供所述通式I所示的芳香酰胺化合物或其藥學上可接受的鹽在制備治療或預防與雄激素相關的疾病的藥物方面的應用。

          本發明的又一個目的是提供治療或預防與雄激素相關的疾病的方法,包括給予有此需要的哺乳動物治療或預防有效量的通式I所示的化合物或其藥學上可接受的鹽。

          在本發明的較佳實施方案中,所述與雄激素相關的疾病包括前列腺癌、前列腺增生、乳腺癌、膀胱癌,粉刺、多毛、脫發等。

          在本發明中,術語“鹵素”是指氟、氯、溴或碘。

          在本發明中,“C1-6烷基”是指碳原子數1~6的直鏈或者支鏈的脂肪族飽和烴基,例如,作為具體的基團,可以列舉甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、叔丁基、戊基、異戊基、己基等。其中優選是碳原子數為1~4個的C1-4烷基,更優選是碳原子數為1~3個的C1-3烷基。

          在本發明中,“C2-6烯基”是指具有不飽和雙鍵的碳原子數2~6個的直鏈或者支鏈狀的脂肪族烴基,例如可以列舉乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、2-甲基-1-丙烯基、2-甲基-2-丙烯基、2-丁烯-1-基、3-丁烯-1-基、2-戊烯-1-基、3-戊烯-1-基、4-戊烯-1-基、5-己烯-1-基、4-己烯-1-基、3-己烯-1-基、2-己烯-1-基等。其中優選是碳原子數為2~4個的C2-4烯基,更優選是碳原子數為2~3個的C2-3烯基。

          在本發明中,“C2-6炔基”是指具有不飽和三鍵的碳原子數2~6個的直鏈或者支鏈狀的脂肪族烴基,例如可以列舉乙炔基、1-丙炔-1-基、2-丙炔-1-基、2-丁炔-1-基、3-丁炔-1-基、2-戊炔-1-基、3-戊炔-1-基、4-戊炔-1-基、5-己炔-1-基、4-己炔-1-基、3-己炔-1-基和2-己炔-1-基等。其中優選是碳原子數為2~4個的C2-4炔基,更優選是碳原子數為2~3個的C2-3炔基。

          在本發明中,“C3-6環烷基”是指碳原子數3~6個的環狀脂肪族烴基,例如,作為具體的基團可以列舉環丙基、環丁基、環戊基和環己基等。

          在本發明中,“C1-6烷氧基”是指鍵合有上述定義的“C1-6烷基”的氧基,例如可舉出:甲氧基、乙氧基、1-丙氧基、2-丙氧基、正丁氧基、異丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基等。

          在本發明中,“C1-6烷基羰基”是指上述定義的“C1-6烷基”與羰基(-C(=O))鍵合而成的基團,例如可以舉出:乙酰基、丙酰基、丁酰基、異丁酰基、戊酰基、異戊酰基、特戊酰基等。

          在本發明中,“羥基C1-6烷基”是指上述定義的“C1-6烷基”被羥基取代而成的基團,例如可以舉出:1-羥基乙基 ()、2-羥基乙基、1-羥基丙基 、2-羥基丙基、3-羥基丙基、1-羥基丁基 、2-羥基丁基、3-羥基丁基、4-羥基丁基等。

          應予說明,上述定義中,例如“C1”等的“C”表示碳原子,其后附帶的數字表示碳原子數。例如,“C1-6”表示碳原子數1到碳原子數6的范圍。

          在本發明中,表述“任選被1個以上的基團(取代基)取代”是指任選地在要被取代的基團的任意的位置用1個或多個相同或不同的基團(取代基)取代。例如,“C1-6烷基任選地被1個以上的鹵素原子取代”是指C1-6烷基可以不被取代,或者可以在C1-6烷基的任意的可被取代的位置用1個或多個鹵素原子取代。

          在本發明中,通式右側的環中的“”表示該環為不飽和環。

          在本發明中,術語“芳基”是指未被取代或被取代基取代的5-10元具有芳香性的單環或雙環系碳環基團或含有選自N、O和S的雜原子的單環或雙環系雜環基團,其中雙環系的一個環可以是被氫化的;包括例如苯基、萘基、二氫萘基、四氫萘基、吡啶基、噠嗪基、嘧啶基、吡嗪基、呋喃基、咪唑基、吡喃基、吡唑基、噁唑基、異噁唑基、噻唑基、異噻唑基、噻吩基、嘌呤基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、二嗪基、異苯并噻吩基、異苯并呋喃基、吲哚基、異吲哚基、喹啉基、異喹啉基等;所述取代基選自氫原子、烷基、鹵素、三氟甲基、氰基、硝基、等基團。

          在本發明中,所述“藥學上可接受的鹽”是指在藥學上無毒的酸與本發明通式I所示的化合物的堿性部分反應形成的鹽,包括例如鹽酸鹽、醋酸鹽、氫溴酸鹽、硫酸鹽、硫酸氫鹽、碳酸鹽、碳酸氫鹽、亞硫酸鹽、磷酸鹽、磷酸氫鹽、草酸鹽、丙二酸鹽、戊酸鹽、硼酸鹽、對甲苯磺酸鹽、甲磺酸鹽、酒石酸鹽、苯甲酸鹽、乳酸鹽、檸檬酸鹽、馬來酸鹽、富馬酸鹽、蘋果酸鹽、水楊酸鹽、扁桃酸鹽、琥珀酸鹽、葡萄糖酸鹽、乳糖酸鹽等。這種鹽可以通過本領域技術人員公知的方法來制備。

          實驗證明,本發明通式I所示的化合物能夠與雄激素受體結合,具有顯著的抵抗雄激素并且降解雄激素受體活性。所述化合物能夠單獨或作為組合物用于治療各種與雄激素相關的疾病,包括例如前列腺癌、前列腺增生、乳腺癌、膀胱癌,還能用于粉刺、多毛、脫發等疾病的治療。

          因此,本發明還提供含有所述通式I所示的化合物或其藥學上可接受的鹽的藥物組合物,和含有所述通式I所示的化合物或其藥學上可接受的鹽和藥學上可接受的載體的藥物制劑。

          所述藥學上可接受的載體可以包括本領域常規的藥用載體,例如稀釋劑、填充劑、粘合劑、崩解劑、潤滑劑、溶劑、增溶劑等;包括但不限于例如淀粉、糖粉、磷酸鈣、硬脂酸鎂、滑石粉、糊精、纖維素及其衍生物、微晶纖維素、聚乙二醇、生理鹽水、葡萄糖溶液等。

          本發明藥物組合物和藥物制劑也可以包括各種其它常用的添加劑,例如防腐劑、乳化劑、助懸劑、矯味劑等。

          本發明藥物組合物可以制備成藥學上可接受的任何適當的劑型,包括但不限于例如片劑、膠囊劑、丸劑、顆粒制劑、糖漿劑、注射劑、溶液劑、混懸劑等。

          本發明通式I所示的化合物或其藥學上可接受的鹽可以通過任何有效途徑施用于哺乳動物,例如人,所述途徑包括口服、靜脈內、腹膜內、肌肉內、局部、透皮、經眼、經鼻、吸入、皮下、肌內、口含、舌下、直腸等。它們可以單獨給藥,或者與其他活性成分聯合給藥。本發明通式I化合物或其藥學上可接受的鹽的有效量可以由本領域技術人員例如主治醫生等通過使用常規方法來確定。在確定本發明化合物的有效量時,許多因素應被主治醫生考慮,包括但不限于;所要給與的具體化合物;與其它藥劑的聯合用藥;哺乳動物的種類、大小、年齡和一般健康狀況;疾病的嚴重程度;個體患者的反應;給藥方式;所給藥的制劑的生物利用率特性;所選擇的劑量方案;其它伴隨藥物的使用;以及其它相關的情況等。通常劑量為10-1000毫克。

          具體實施方式

          下面用實施例進一步具體地描述本發明,顯然,所描述的實施例僅是本發明的一部分,而不是全部。這些實施例僅用于例證本發明,不應將其理解為對本發明保護范圍的限制。基于本發明的實施例,本領域技術人員在沒有付出創造性勞動前提下所獲得的所有其它技術方案,都屬于本發明保護的范圍。

          實施例中,縮寫THF代表四氫呋喃、DMSO-d6代表氘代二甲基亞砜、DMSO代表二甲基亞砜、HPLC代表高效液相色譜、EDCI代表[1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳二亞胺](1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide)、DIPEA代表(N,N-二異丙基乙胺)(N,N-Diisopropylethylamine)、HOBT代表(羥基苯并三唑)(Hydroxybenzotriazole)、DMF代表二甲基甲酰胺。

          1H NMR測定用Bruker AVANCE II 400MHz核磁共振儀,其中s代表單峰、bs或brs代表寬單峰、d代表二重峰、m代表多重峰,Ar為芳基。質譜測定用Bruker amaZon SL質譜儀。高分辨質譜測定用Waters Acquity HPLC + Xeno G2-S TOF Mass。 高壓液相色譜測定用SHIMADZU CBM-20A。薄層層析測定用 Silica gel 60F254 Plates (Merck)。

          I.化合物制備實施例

          實施例1

          S)-5-乙酰基-N-(3-(4-氰基-3-三氟甲基-苯基)-氨基)-2-羥基-2-甲基-3-氧代丙基)-1H-吡唑-3-羧酰胺 (C18H16F3N5O4) 的制備

          第一步反應

          把二氯亞砜(2.4毫升,33.6毫摩爾)逐滴加入到(R)-3-溴-2-羥基-2- 甲基丙酸(5.11克,28毫摩爾)在30毫升THF的溶液中,滴加的溫度控制在0-12℃,用時10分鐘。將所得的混合物在相同條件下攪拌2小時。內溫調整到-5℃左右,向反應的混合物緩慢加入三乙基胺(Et3N)(5.0毫升, 36.4 mmol, 1.3eq),加料過程中內溫低于12℃。在相同的反應條件攪拌20分鐘。隨后向其中逐滴加入4–氰基-3-三氟甲基-苯胺(4.0克,21毫摩爾)在40 mL THF中的溶液,將所得混合物于50 ℃攪拌兩個小時。反應液冷卻至20 ± 5℃,然后加入水(15毫升,2.9體積)和甲苯(20毫升,4.0體積),短暫攪拌后分液,有機相用水洗滌(15毫升,2.9體積),將有機相合并后通過減壓蒸餾濃縮至5 ± 0.5體積(6.4重量),蒸餾過程中保持溫度低于50℃。濃縮液中加入甲苯(31毫升,6體積),稀釋至5 ± 0.5體積(6.4重量),將溫度調整到2.5 ± 2.5℃,在該溫度下攪拌一小時,加入晶種(0.018克,0.005重量),繼續攪拌一小時,過濾,濾餅用甲苯洗兩次(每次8.5毫升,每次1.7體積)。然后將該批料在真空干燥箱干燥,得到5.8克(R)-3-溴-N-(4-氰基-3-三氟甲基-苯基)-2-羥基-2-甲基丙酰胺。產率59%, HPLC(流動相為水和乙氰) 純度99%(220nm),99%(254nm),光學 HPLC 純度99%。

          核磁共振譜:1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ10.52 (s, 1H, NH), 8.55(d, J=1.6Hz,1H, ArH), 8.31(dd, J=8.2Hz, J=1.6Hz, 1H, ArH), 8.11(d, J=8.2Hz, 1H, ArH), 6.40(s, 1H, OH), 3.84(d, J=10.4Hz, 1H, CH), 3.60(d, J=10.4Hz, 1H, CH), 1.50(s, 3H, CH3)。

          質譜:(ESI, Positive): 351.9[M+H]+

          第二步反應

          在250mL園底燒瓶中加入(R)-3-溴-N-(4-氰基-3-三氟甲基-苯基)-2-羥基-2-甲基丙酰胺(2.00克, 5.696毫摩爾),40mL無水DMSO作為溶劑,再加入疊氮鈉(sodium azide)(1.84克, 0.02848摩爾),然后將反應液在氬氣保護下于室溫攪拌3天。

          薄層色譜法(展開劑為己烷:乙酸乙酯 = 2:1)確定反應完成后,加入乙酸乙酯和水,二相分離,有機相用鹽水洗滌、硫酸鎂干燥、過濾、溶劑交換為甲醇,初產物(S)-3-疊氮基-N-(4-氰基-3-三氟甲基-苯基)-2-羥基-2-甲基丙酰胺直接用于下一步反應。

          核磁共振譜:1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ9.00(bs, 1H, NH), 8.08(s, 1H, ArH), 7.95(d, J=8.4 Hz, 1H, ArH), 7.81(d, J=8.4 Hz, 1H, ArH), 3.92 (d, J=12.4Hz, 1H, CH), 3.50 (d, J=12.4Hz, 1H, CH), 2.96 (s, 1H, OH), 1.54 (s, 3H, CH3)。

          質譜:(ESI, Negative): 312.18 [M-H]-; (ESI, Positive): 314.03 [M+H]+

          第三步反應

          將(S)-3-疊氮基-N-(4-氰基-3-三氟甲基-苯基)-2-羥基-2-甲基丙酰胺(1.78克,5.696毫摩爾)的甲醇(30mL)溶液用鈀碳催化氫化 (30 psi),反應3-4 小時。

          薄層色譜法確定反應完成后,硅藻土過濾,抽干,得到黃色/淡棕色粉未物質,干燥,得(S)-3-氨基-N-(4-氰基-3-三氟甲基-苯基)-2-羥基-2-甲基丙酰胺1.57克,產率約為96%。

          核磁共振譜:1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ9.01(bs, 1H, NH), 8.10(s, 1H, ArH), 7.98(d, J=8.6Hz, 1H, ArH), 7.79(d, J=8.6Hz, 1H, ArH), 5.10(m, 2H, NH2), 4.12 (d, J=12.4Hz, 1H, CH), 3.75 (d, J=12.4Hz, 1H, CH), 3.02(s, 1H, OH), 1.51 (s, 3H, CH3)。

          質譜: (ESI, Positive):288.09 [M+H]+

          第四步反應

          在100mL園底燒瓶中加入5-乙酰基-1H-吡唑-3-羧酸(0.13克, 0.8355毫摩爾),2.0mL無水DMF作為溶劑,再加入EDCI (0.16克, 1.0444毫摩爾), DIPEA(0.18克, 1.3926毫摩爾)和HOBT (32毫克, 0.2098毫摩爾),將所得混合物攪拌20分鐘。將另一原料 (S)-3-氨基-N-(4-氰基-3-三氟甲基-苯基)-2-羥基-2-甲基丙酰胺 (0.20克, 0.6963毫摩爾)溶解于5.0mL 無水DMF,加入上述混合物中,然后反應液在氬氣保護下于室溫攪拌3天。

          薄層色譜法確定反應完成后,加入乙酸乙酯和水,二相分離,將有機相抽干,得到油狀物質。硅膠柱層析分離(流動相為二氯甲烷:甲醇 = 9:1),純化,得到淡黃色粉未物質0.14克,產率約為50%。

          核磁共振譜:1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ14.19(s, 1H, 吡唑-NH), 10.53(s, 1H, NH), 8.50(s, 1H, ArH), 8.35(br s, 1H, NH), 8.26(d, J=8.8Hz, 1H, ArH), 8.09(d, J=8.8Hz, 1H, ArH), 7.37(s, 1H, 吡唑-H), 6.20(s, 1H, OH), 3.62-3.58(m, 2H, CH2), 1.99(s, 3H, CH3), 1.38(s, 3H, CH3)。

          質譜:(ESI, Negative): 422.16 [M-H]-

          實施例2

          N-(S)-(3-(4-氰基-3-三氟甲基-苯基)-氨基)-2-羥基-2-甲基-3-氧代丙基)-5-(1-羥基乙基)-1H-吡唑-3-羧酰胺的制備

          在100mL園底燒瓶中加入(S)-5-乙酰基-N-(3-(4-氰基-3-三氟甲基-苯基)-氨基)-2-羥基-2-甲基-3-氧代丙基)-1H-吡唑-3-羧酰胺(0.10克, 0.2362毫摩爾),5 mL無水乙醇作為溶劑,向此反應液中緩慢加入硼氫化鈉(sodium borohydride,22毫克,0.5905mmol)和乙醇的懸浮液,然后反應液在氬氣保護下,室溫中,攪拌過夜。

          薄層色譜法確定反應完成后,加入0.5mL水和1mL 0.5M HCl,短暫攪拌后減壓蒸餾濃縮至干,然后加二氯甲烷(20mL)溶解,有機相用NaHCO3水溶液、鹽水洗滌、硫酸鎂干燥、過濾、抽干得到油狀物質。硅膠柱層析分離(流動相為二氯甲烷:甲醇 = 9:1),純化,得到淡黃色粉未物質76毫克,產率約為76%。

          核磁共振譜:1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ13.56(s, 1H, 吡唑-NH), 10.52(s, 1H, NH), 8.49(s, 1H, ArH), 8.33(br s, 1H, NH), 8.25(d, J=8.8Hz, 1H, ArH), 8.09(d, J=8.8Hz, 1H, ArH), 7.31(s, 1H, 吡唑-H), 6.20(s, 1H, OH), 4.68-4.62(m, 1H, CH), 3.64-3.58(m, 3H, OH+CH2), 1.51(s, 3H, CH3), 1.38(s, 3H, CH3)。

          質譜: (ESI, negative) m/z 424.10 [M-H]-

          實施例3

          (S)-N-(3-(4-氰基-3-三氟甲基-苯基)-氨基)-2-羥基-2-甲基-3-氧代丙基)-5-三氟甲基-1H-吡唑-3-羧酰胺 (C17H13F6N5O3) 的制備

          在100mL園底燒瓶中加入5-三氟甲基-1H吡唑-3-羧酸(0.23克, 1.253毫摩爾),2.3mL無水DMF作為溶劑,再加入EDCI (0.24克, 1.567毫摩爾), DIPEA(0.27克, 2.089毫摩爾)和HOBT (48毫克, 0.3133毫摩爾),攪拌20分鐘。加入另一原料 (S)-3-氨基-N-(4-氰基-3-三氟甲基-苯基)-2-羥基-2-甲基丙酰胺 (0.30克, 1.044毫摩爾)在6.0mL 無水DMF中的溶液,然后將反應液在氬氣保護下于室溫攪拌3天。

          薄層色譜法確定反應完成后,加入乙酸乙酯和水,二相分離,將有機相抽干,得到油狀物質。硅膠柱層析分離(流動相為二氯甲烷:甲醇 = 9:1),純化,得到淡黃色粉未物質0.23克,產率約為50%。

          核磁共振譜:1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ14.41(s, 1H, 吡唑-NH), 10.50(s, 1H, NH), 8.58(s, 1H, NH), 8.48(s, 1H, ArH), 8.26(d, J=8.0Hz, 1H, ArH), 8.09(d, J=8.0Hz, 1H, ArH), 7.36(s, 1H, 吡唑-H), 6.12(s, 1H, OH), 3.67-3.45(m, 2H, CH2), 1.39(s, 3H, CH3)。

          質譜:(ESI, Negative): 448.00 [M-H]-

          實施例4

          (S)-5-氯-N-(3-(4-氰基-3-三氟甲基-苯基)-氨基)-2-羥基-2-甲基-3-氧代丙基)-1H-吡唑-3-羧酰胺(C16H13ClF3N5O3)的制備

          在100mL園底燒瓶中加入5-氯-1H-吡唑-3-羧酸(0.122克, 0.8355毫摩爾),1.5mL無水DMF作為溶劑,再加入EDCI (0.16克, 1.0444毫摩爾),DIPEA(0.24mL, 1.3926毫摩爾)和HOBT (32毫克, 0.2089毫摩爾),攪拌20分鐘。加入另一原料 (S)-3-氨基-N-(4-氰基-3-三氟甲基-苯基)-2-羥基-2-甲基丙酰胺 (0.20克, 0.6963毫摩爾)在4.0mL 無水DMF中的溶液,然后將反應液在氬氣保護下,于室溫攪拌3天。

          薄層色譜法確定反應完成后,加入乙酸乙酯和水,二相分離,將有機相抽干,得到油狀物質。硅膠柱層析分離(流動相為二氯甲烷:甲醇 = 9:1),純化,得到淡黃色粉未物質0.15克,產率約為51.0%。

          核磁共振譜:1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ13.79(s, 1H, NH), 10.50(s, 1H, NH), 8.50(s, 1H, ArH), 8.44(bs, 1H, NH), 8.25(d, J=8.2Hz, 1H, ArH), 8.10(d, J=8.2Hz, 1H, ArH), 6.93(s, 1H, 吡唑-H), 6.11(s, 1H, OH), 3.66-3.61(m, 1H, CH2), 3.54-3.50(m, 1H, CH2), 1.38(s, 3H, CH3)。

          質譜: (ESI, Negative) m/z 414.25 [M-H]-

          實施例5

          (S)-5-溴-N-(3-(4-氰基-3-三氟甲基-苯基)-氨基)-2-羥基-2-甲基-3-氧代丙基)-1H-吡唑-3-羧酰胺 (C16H13BrF3N5O3) 的制備

          在100mL園底燒瓶中加入5-溴-1H-吡唑-3-羧酸(0.16克, 0.8355毫摩爾),1.5mL無水DMF作為溶劑,再加入EDCI (0.16克, 1.0444毫摩爾),DIPEA(0.24mL, 1.3926毫摩爾)和HOBT (32毫克, 0.2089毫摩爾),攪拌20分鐘。加入另一原料 (S)-3-氨基-N-(4-氰基-3-三氟甲基-苯基)-2-羥基-2-甲基丙酰胺 (0.20克, 0.6963毫摩爾)在4.0mL 無水DMF中的溶液,然后將反應液在氬氣保護下,于室溫攪拌3天。

          薄層色譜法確定反應完成后,加入乙酸乙酯和水,二相分離,將有機相抽干,得到油狀物質。硅膠柱層析分離(流動相為二氯甲烷:甲醇 = 9:1),純化,得到淡黃色粉未物質0.176克,產率約為55.0%。

          核磁共振譜:1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ13.82(s, 1H, NH), 10.49(s, 1H, NH), 8.51(m, 2H), 8.27(d, J=8.2Hz, 1H, ArH), 8.08(d, J=8.2Hz, 1H, ArH), 7.38(s, 1H, 吡唑-H), 6.13(s, 1H, OH), 3.65-3.50(m, 2H, CH2), 1.39(s, 3H, CH3)。

          質譜: (ESI, Negative) m/z 457.97 [M-H]-

          實施例6

          (S)-N-(3-(4-氰基-3-三氟甲基-苯基)-氨基)-2-羥基-2-甲基-3-氧代丙基)-5-硝基-1H-吡唑-3-羧酰胺 (C16H13F3N6O5) 的制備

          在100mL園底燒瓶中加入5-硝基-1H-吡唑-3-羧酸(0.13克, 0.8355毫摩爾),1.5mL無水DMF作為溶劑,再加入EDCI (0.16克, 1.0444毫摩爾), DIPEA(0.24mL, 1.3926毫摩爾)和HOBT (32毫克, 0.2089毫摩爾),攪拌20分鐘。加入另一原料 (S)-3-氨基-N-(4-氰基-3-三氟甲基-苯基)-2-羥基-2-甲基丙酰胺 (0.20克, 0.6963毫摩爾)在4.0mL 無水DMF中的溶液,然后將反應液在氬氣保護下,于室溫攪拌3天。

          薄層色譜法確定反應完成后,加入乙酸乙酯和水,二相分離,將有機相抽干,得到油狀物質。硅膠柱層析分離(流動相為二氯甲烷:甲醇 = 9:1),純化,得到黃色粉未物質0.14克,產率約為48.0%。

          核磁共振譜:1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ14.62(s, 1H, NH), 10.54(s, 1H, NH), 8.59(s, 1H, NH), 8.50(s, 1H, ArH), 8.27(d, J=8.8Hz, 1H, ArH), 8.09(d, J=8.8Hz, 1H, ArH), 7.41(s, 1H, 吡唑-H), 6.22(s, 1H, OH), 3.70-3.51(m, 2H, CH2), 1.39(s, 3H, CH3)。

          質譜: (ESI, Negative) m/z 425.03 [M-H]-

          實施例7

          (S)-5-氰基-N-(3-(4-氰基-3-三氟甲基-苯基)-氨基)-2-羥基-2-甲基-3-氧代丙基)-1H-吡唑-3-羧酰胺 (C17H13F3N6O3) 的制備

          在100mL園底燒瓶中加入5-氰基-1H-吡唑-3-羧酸(0.115克, 0.8355毫摩爾) ,1.5mL無水DMF作為溶劑,再加入 EDCI (0.16克, 1.0444毫摩爾), DIPEA(0.24mL, 1.3926毫摩爾)和HOBT (32毫克, 0.2089毫摩爾),攪拌20分鐘。加入另一原料 (S)-3-氨基-N-(4-氰基-3-三氟甲基-苯基)-2-羥基-2-甲基丙酰胺 (0.20克, 0.6963毫摩爾)在4.0mL 無水DMF中的溶液,然后將反應液在氬氣保護下,于室溫攪拌3天。

          薄層色譜法確定反應完成后,加入乙酸乙酯和水,二相分離,將有機相抽干,得到油狀物質。硅膠柱層析分離(流動相為二氯甲烷:甲醇 = 95:5),純化,得到淡黃色粉未物質得0.15克,產率約為54.0%。

          核磁共振譜:1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ14.53(s, 1H, NH), 10.52(s, 1H, NH), 8.58(s, 1H, NH), 8.49(s, 1H, ArH), 8.26(d, J=8.4Hz, 1H, ArH), 8.09(d, J=8.4Hz, 1H, ArH), 7.39(s, 1H, 吡唑-H), 6.19(s, 1H, OH), 3.68-3.52(m, 2H, CH2), 1.38(s, 3H, CH3)。

          質譜: (ESI, Negative) m/z 405.05 [M-H]-

          實施例8

          (S)-N-(3-(4-氰基-3-三氟甲基-苯基)-氨基)-2-羥基-2-甲基-3-氧代丙基)-5-(4-氟苯基)-1H-吡唑-3-羧酰胺 (C22H17F4N5O3) 的制備

          在100mL園底燒瓶中加入5-(4-氟-苯基)-1H-吡唑-3-羧酸(0.17克, 0.8355毫摩爾),1.7mL無水DMF作為溶劑, 再加入EDCI (0.16克, 1.0444毫摩爾), DIPEA(0.24mL, 1.3926毫摩爾)和HOBT (32毫克, 0.2089毫摩爾),攪拌20分鐘。加入另一原料 (S)-3-氨基-N-(4-氰基-3-三氟甲基-苯基)-2-羥基-2-甲基丙酰胺 (0.20克, 0.6963毫摩爾)在4.0mL 無水DMF中的溶液,然后將反應液在氬氣保護下,于室溫攪拌3天。

          薄層色譜法確定反應完成后,加入乙酸乙酯和水,二相分離,將有機相抽干,得到油狀物質。硅膠柱層析分離(流動相為二氯甲烷:甲醇 = 95:5),純化,得到淡黃色粉未物質得0.17克,產率約為50.0%。

          核磁共振譜:1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ14.20(s, 1H, NH), 10.51(s, 1H, NH), 8.52-8.50(m, 2H), 8.25(d, J=8.8Hz, 1H, ArH), 8.09(d, J=8.8Hz, 1H, ArH), 7.65-7.57(m, 2H, ArH), 7.36(s, 1H, 吡唑-H), 7.16-7.06(m, 2H, ArH), 6.15(s, 1H, OH), 3.66-3.53(m, 2H, CH2), 1.38(s, 3H, CH3)。

          質譜: (ESI, Negative) m/z 474.08 [M-H]-

          實施例9

          (S)-N-(3-(3-氯-4-氰基-苯基)-氨基)-2-羥基-2-甲基-3-氧代丙基)-5-三氟甲基-1H-吡唑-3-羧酰胺(C16H13ClF3N5O3) 的制備

          第一步反應

          把二氯亞砜(2.38毫升,32.787毫摩爾)逐滴加入到(R)-3-溴-2-羥基-2-甲基丙酸(5.00克,27.322毫摩爾)在30毫升THF的溶液中,滴加的溫度控制在0-12℃,用時10分鐘。將所得的混合物在相同條件下攪拌2小時。內溫調整到-5℃左右,向反應的混合物緩慢加入三乙基胺(4.95毫升, 35.52 mmol, 1.3eq),加料過程中內溫低于12℃。在相同的反應條件攪拌20分鐘。隨后向其中逐滴加入3 -氯-4–氰基-苯胺(3.96克,25.96毫摩爾)在40 mL THF中的溶液,將所得混合物于50℃攪拌兩個小時。硅膠柱層析分離(流動相為己烷:乙酸乙酯 = 2:1),純化,真空干燥箱干燥,得到7.30克(R)-3-溴-N-(3-氯-4-氰基-苯基)- 2-羥基-2-甲基丙酰胺。產率88.6%, HPLC 純度99%(220nm),99%(254nm)。

          核磁共振譜:1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ10.22 (s, 1H, NH), 8.13(d, J=2.0Hz,1H, ArH), 7.88(dd, J=8.2Hz, J=2.0Hz, 1H, ArH), 7.80(d, J=8.2Hz, 1H, ArH), 6.20(s, 1H, OH), 3.94(d, J=10.4Hz, 1H, CH), 3.72(d, J=10.4Hz, 1H, CH), 1.48(s, 3H, CH3)。

          質譜:(ESI, Positive):351.99 [M+H]+

          第二步反應

          在250mL園底燒瓶中加入(R)-3-溴-N-(3-氯-4-氰基-苯基)- 2-羥基-2-甲基丙酰胺(2.00克, 6.278毫摩爾),加入40mL無水DMSO作為溶劑,再加入疊氮鈉(sodium azide)(2.05克, 0.03149摩爾),然后將反應液在氬氣保護下,于80℃攪拌過夜。

          薄層色譜法確定反應完成后,加入乙酸乙酯和水,二相分離,將有機相用鹽水洗滌、硫酸鎂干燥、過濾、溶劑交換為甲醇,初產物 (S)-3-疊氮基-N-(3-氯-4-氰基-苯基)- 2-羥基-2-甲基丙酰胺直接用于下一步反應。

          核磁共振譜:1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ8.95(bs, 1H, NH), 8.03(s, 1H, ArH), 7.86(d, J=8.4 Hz, 1H, ArH), 7.74(d, J=8.4 Hz, 1H, ArH), 3.91(d, J=12.4 Hz, 1H, CH), 3.49(d, J=12.4 Hz, 1H, CH), 2.95(s, 1H, OH), 1.56(s, 3H, CH3)。

          質譜:(ESI, Negative): 278.42[M-H]-; (ESI, Positive): 280.03[M+H]+

          第三步反應

          將(S)-3-疊氮基-N-(3-氯-4-氰基-苯基)- 2-羥基-2-甲基丙酰胺(1.68克, 5.9739毫摩爾)的甲醇(30mL)溶液用鈀碳催化氫化(30 psi),反應3-4 小時。

          薄層色譜法確定反應完成后,硅藻土過濾,抽干,得到黃色/淡棕色粉未狀 (S)-3-氨基-N-(3-氯-4-氰基-苯基)- 2-羥基-2-甲基丙酰胺1.47克,產率約為97%。

          質譜: (ESI, Positive):254.03 [M+H]+

          第四步反應

          在100mL園底燒瓶中加入5-三氟甲基-1H-吡唑-3-羧酸(0.256克, 1.4191毫摩爾), 2.6mL無水DMF作為溶劑,再加入EDCI (0.275克, 1.7748毫摩爾), DIPEA(0.41mL, 2.365毫摩爾)和HOBT (54毫克, 0.3548毫摩爾),攪拌20分鐘。加入另一原料 (S)-3-氨基-N-(3-氯-4-氰基-苯基)- 2-羥基-2-甲基丙酰胺(0.30克, 1.1826毫摩爾)在6.0mL 無水DMF中的溶液,然后將反應液在氬氣保護下,于室溫攪拌3天。

          薄層色譜法(展開劑為二氯甲烷:甲醇 = 9:1)確定反應完成后,加入乙酸乙酯和水,二相分離,將有機相抽干,得到油狀物質。硅膠柱層析分離(流動相為二氯甲烷:甲醇 = 9:1),純化,得到淡黃色粉未物質0.30克,產率約為61.0%。

          核磁共振譜:1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ14.40(s, 1H, NH), 10.42(s, 1H, NH), 8.49(s, 1H, NH), 8.11(d, J=1.6Hz, 1H, ArH), 7.86(d, J=8.8Hz, J=1.6Hz, 1H, ArH), 7.81(d, J=8.8Hz, 1H, ArH), 7.34(s, 1H, 吡唑-H), 6.10(s, 1H, OH), 3.65-3.51(m, 2H, CH2), 1.42(s, 3H, CH3)。

          質譜: (ESI, Negative) m/z 414.03 [M-H]-

          實施例10

          (S)-N-(3-(6-氰基-5-三氟甲基-吡啶-3-基)-氨基)-2-羥基-2-甲基-3-氧代丙基)-5-三氟甲基-1H-吡唑-3-羧酰胺(C16H12F6N6O3) 的制備

          第一步反應

          把二氯亞砜(2.39毫升,32.79毫摩爾)逐滴加入到(R)-3 -溴-2-羥基-2-甲基丙酸(5.00克,27.322毫摩爾)在30毫升THF的溶液中,滴加的溫度控制在0-12℃,用時10分鐘。將所得的混合物在相同條件下攪拌2小時。內溫調整到-5℃左右,向反應的混合物緩慢加入三乙基胺(4.95毫升, 35.52 mmol, 1.3eq),加料過程中內溫低于12℃。在相同的反應條件攪拌20分鐘。隨后向其中加入5-氨基-3-三氟甲基-2-氰基吡啶(4.86克,25.97毫摩爾)在40 mL THF中的溶液,將所得混合物于50℃攪拌兩個小時。反應液冷卻至20 ± 5℃,然后加入水(15毫升,2.9體積)和乙酸乙酯(20毫升,4.0體積),短暫攪拌后分液,有機相用水洗滌(15毫升,2.9體積)一次,將有機相合并后通過減壓蒸餾濃縮至干。將殘留物用硅膠柱層析分離(流動相為己烷:乙酸乙酯 = 2:1),純化,真空干燥箱干燥,得到7.77克 (R)-3-溴-N-(6-氰基-5-三氟甲基-吡啶-3-基)- 2-羥基-2-甲基丙酰胺。產率85%, HPLC 純度99%(220nm),99%(254nm)。

          核磁共振譜:1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ10.82(s, 1H, NH), 9.41(d, J=2.0Hz, 1H, ArH), 8.90(d, J=2.0Hz, 1H, ArH), 6.51(s, 1H, OH), 3.84(d, J=10.4Hz, 1H, CH), 3.61(d, J=10.4Hz, 1H, CH), 1.50(s, 3H, CH3)。

          質譜:(ESI, Positive):351.9915 [M+H]+

          第二步反應

          在250mL園底燒瓶中加入(R)-3-溴-N-(6-氰基-5-三氟甲基-吡啶-3-基)- 2-羥基-2-甲基丙酰胺 (2.00克, 5.680毫摩爾),加入40mL無水DMSO作為溶劑,再加入疊氮鈉(sodium azide)(1.85克, 0.0288摩爾),然后反應液在氬氣保護下,于80℃攪拌14小時。

          薄層色譜法確定反應完成后,加入乙酸乙酯和水并進行二相分離,將有機相用鹽水洗滌、硫酸鎂干燥、過濾、溶劑交換為甲醇,初產物(S)-3-疊氮基-N-(6-氰基-5-三氟甲基-吡啶-3-基)- 2-羥基-2-甲基丙酰胺直接用于下一步反應。

          核磁共振譜:1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ9.18(bs, 1H, NH), 8.92(s, 1H, ArH), 8.55(s, 1H, ArH), 3.94(d, J=12.4Hz, 1H, CH), 3.52(d, J=12.4Hz, 1H, CH), 2.97(s, 1H, OH), 1.55 (s, 3H, CH3)。

          質譜:(ESI, Negative): 313.16[M-H]-; (ESI, Positive): 315.04[M+H]+

          第三步反應

          將(S)-3-疊氮基-N-(6-氰基-5-三氟甲基-吡啶-3-基)- 2-羥基-2-甲基丙酰胺(1.78克, 5.6607毫摩爾)的甲醇(30mL)溶液用鈀碳催化氫化 (30 psi),反應3-4 小時。

          薄層色譜法確定反應完成后,硅藻土過濾,抽干,干燥,得到黃色/淡棕色粉未狀(S)-3-氨基-N-(6-氰基-5-三氟甲基-吡啶-3-基)- 2-羥基-2-甲基丙酰胺1.55克,產率約為95%。

          質譜: (ESI, Positive):289.09 [M+H]+

          第四步反應

          在100mL園底燒瓶中加入5-三氟甲基-1H-吡唑-3-羧酸(0.225克, 1.2490毫摩爾), 加入2.3mL無水DMF作為溶劑,再加入EDCI (0.24克, 1.5612毫摩爾), DIPEA(0.26mL, 2.0817毫摩爾)和HOBT (48毫克, 0.3123毫摩爾) ,攪拌20分鐘。加入另一原料(S)-3-氨基-N-(6-氰基-5-三氟甲基-吡啶-3-基)- 2-羥基-2-甲基丙酰胺 (0.30克, 1.0408毫摩爾)在6.0mL 無水DMF中的溶液,然后將反應液在氬氣保護下,于室溫攪拌3天。

          薄層色譜法確定反應完成后,加入乙酸乙酯和水,二相分離,將有機相抽干,得到油狀物質。硅膠柱層析分離(流動相為二氯甲烷:甲醇 = 7:1),純化,得到淡黃色粉未物質0.28克,產率約為60.0%。

          核磁共振譜:1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ14.42(s, 1H, NH), 10.73(s, 1H, NH), 9.32(s, 1H, ArH), 8.82(s, 1H, ArH), 8.60(s, 1H, NH), 7.39(s, 1H, 吡唑-H), 6.41(s, 1H, OH), 3.69-3.55(m, 2H, CH2), 1.39(s, 3H, CH3)。

          質譜: (ESI, Negative) m/z 449.05 [M-H]-

          實施例11

          (S)-N-(3-(6-氰基-吡啶-3-基)-氨基)-2-羥基-2-甲基-3-氧代丙基)-5-三氟甲基-1H-吡唑-3-羧酰胺 (C15H13F3N6O3) 的制備

          第一步反應

          把二氯亞砜(2.39毫升,32.79毫摩爾)逐滴加入到(R)-3 -溴-2-羥基-2-甲基丙酸(5.00克,27.322毫摩爾)在30毫升THF的溶液中,滴加的溫度控制在0-12℃,用時10分鐘。將所得的混合物在相同條件下攪拌2小時。內溫調整到-5℃左右,向反應混合物緩慢加入Et3N(4.95毫升, 35.52 mmol, 1.3eq),加料過程中內溫低于12℃。在相同的反應條件攪拌20分鐘。隨后向其中逐滴加入5-氨基-2-氰基吡啶(3.09克,25.96毫摩爾)在40 mL THF中的溶液,將所得混合物于50℃攪拌兩個小時。反應液冷卻至20 ± 5℃,然后加入水(15毫升,2.9體積)和乙酸乙酯(20毫升,4.0體積),短暫攪拌后分液,有機相用水洗滌(15毫升,2.9體積)一次,將有機相合并后通過減壓蒸餾濃縮至干。硅膠柱層析分離(流動相為二氯甲烷:甲醇 = 19:1),純化,真空干燥箱干燥,得到6.64克 (R)-3-溴-N-(6-氰基-吡啶-3-基)- 2-羥基-2-甲基丙酰胺。產率85%, HPLC 純度99%(220nm), 99%(254nm)。

          核磁共振譜:1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.42(s, 1H, NH), 9.12(d, J=2.4Hz, 1H, ArH), 8.44(dd, J=8.8Hz, J=2.4Hz, 1H, ArH), 8.00(d, J=8.8Hz, 1H, ArH), 6.40(s, 1H, OH), 3.83(d, J=10.4Hz, 1H, CH), 3.59(d, J=10.4Hz, 1H, CH), 1.49(s, 3H, CH3)。

          質譜:(ESI, Positive): 284.0042 [M+H]+

          第二步反應

          在250mL園底燒瓶中加入(R)-3-溴-N-(6-氰基-吡啶-3-基)- 2-羥基-2-甲基丙酰胺(2.00克, 7.0395毫摩爾),40mL無水DMSO作為溶劑,再加入疊氮鈉(sodium azide)(2.29克, 0.035198摩爾),然后將反應液在氬氣保護下,于80℃攪拌過夜。

          薄層色譜法確定反應完成后,加入乙酸乙酯和水,二相分離,有機相用鹽水洗滌、硫酸鎂干燥、過濾、溶劑交換為甲醇,初產物(S)-3-疊氮基-N-(6-氰基-吡啶-3-基)- 2-羥基-2-甲基丙酰胺直接用于下一步反應。

          核磁共振譜:1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ8.98(bs, 1H, NH), 8.77(d, J=2.0Hz,1H, ArH), 8.45(dd, J=8.6Hz, 1H, ArH), 7.79(d, J=8.6Hz, 1H, ArH), 3.93(d, J=12.4Hz, 1H, CH), 3.51(d, J=12.4Hz, 1H, CH), 2.98(s, 1H, OH), 1.55 (s, 3H, CH3)。

          質譜:(ESI, Negative): 245.17[M-H]-; (ESI, Positive): 247.05[M+H]+

          第三步反應

          將(S)-3-疊氮基-N-(6-氰基-吡啶-3-基)- 2-羥基-2-甲基丙酰胺(1.73克, 7.0262毫摩爾)的甲醇(30mL)溶液用鈀碳催化氫化 (30 psi),反應3-4 小時。

          薄層色譜法確定反應完成后,硅藻土過濾,抽干,干燥后得到黃色/淡棕色粉未狀(S)-3-氨基-N-(6-氰基-吡啶-3-基)- 2-羥基-2-甲基丙酰胺1.47克,產率約為95%。

          質譜: (ESI, Positive):221.09 [M+H]+

          第四步反應

          在100mL園底燒瓶中加入5-三氟甲基-1H-吡唑-3-羧酸(0.294克, 1.6347毫摩爾), 加入3.0mL無水DMF作為溶劑,再加入EDCI (0.32克, 2.0433毫摩爾),DIPEA(0.48mL, 2.7244毫摩爾)和HOBT (63毫克, 0.4087毫摩爾),攪拌20分鐘。加入另一原料 (S)-3-氨基-N-(6-氰基-吡啶-3-基)- 2-羥基-2-甲基丙酰胺 (0.30克, 1.622毫摩爾)在6.0mL 無水DMF中的溶液,然后將反應液在氬氣保護下,于室溫攪拌3天。

          薄層色譜法確定反應完成后,加入乙酸乙酯和水,二相分離,將有機相抽干,得到油狀物質。硅膠柱層析分離(流動相為二氯甲烷:甲醇 = 7:1),純化,烘干,得到淡黃色粉未狀目標化合物0.21克,產率約為41.0%。

          核磁共振譜:1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ14.45(s, 1H, NH), 10.54(s, 1H, NH), 9.31(d, J=2.4Hz, 1H, ArH), 8.50-8.47(m, 2H), 8.05(d, J=8.8Hz, 1H, ArH), 7.36(s, 1H, 吡唑-H), 6.13(s, 1H, OH), 3.68-3.49(m, 2H, CH2), 1.39(s, 3H, CH3)。

          質譜: (ESI, Negative) m/z 381.02 [M-H]-

          實施例12

          (S)-N-(3-(4-氰基-3-三氟甲基-苯基)-氨基)-2-羥基-2-甲基-3-氧代丙基)-4-氟苯甲酰胺(C19H15F4N3O3) 的制備

          在100mL園底燒瓶中加入原料(S)-3-氨基-N-(4-氰基-3-三氟甲基-苯基)-2-羥基-2-甲基丙酰胺 (0.22克, 0.7659毫摩爾),無水THF 10mL作為溶劑,氬氣保護,溫度降至0℃,加入4-氟苯甲酰氯 (0.14mL, 1.1489毫摩爾, 1.5equ),攪拌10分鐘,再滴加三乙基胺(Et3N, 0.32mL, 2.2977毫摩爾, 3equ),溫度升至室溫,攪拌,反應時間5-6小時。

          薄層色譜法確定反應完成后,加入乙酸乙酯和水,二相分離,將有機相抽干,得到油狀物質。硅膠柱層析分離(流動相為二氯甲烷:乙酸乙酯 = 19:1),純化,烘干,得到類白色粉未狀目標化合物0.16克,產率約為50%。

          核磁共振譜:1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ10.52(s, 1H, NH), 8.50-8.48(m, 2H, NH+ArH), 8.25(d, J=8.2Hz, 1H, ArH), 8.09(d, J=8.2Hz, 1H, ArH), 7.91-7.87(m, 2H, ArH), 7.30-7.26(m, 2H, ArH), 6.19(s, 1H, OH), 3.66-3.54(m, 2H, CH2), 1.38(s, 3H, CH3)。

          質譜: (ESI, Negative) m/z 408.06 [M-H]-

          實施例13

          (S)-N-(3-(4-氰基-3-三氟甲基-苯基)-氨基)-2-羥基-2-甲基-3-氧代丙基)-4-(三氟甲基)-苯甲酰胺(C20H15F6N3O3) 的制備

          在100mL園底燒瓶中加入原料(S)-3-氨基-N-(4-氰基-3-三氟甲基-苯基)-2-羥基-2-甲基丙酰胺 (0.25克, 0.8704毫摩爾),加入無水THF 10mL作為溶劑,氬氣保護,溫度降至0℃,加入4-(三氟甲基)-苯甲酰氯 (0.55mL, 1.0444毫摩爾, 1.2當量),攪拌10分鐘,再滴加三乙基胺(Et3N, 0.24mL, 1.7408毫摩爾, 2.0當量),溫度升至室溫,攪拌,反應時間5-6小時。

          薄層色譜法確定反應完成后,加水終止反應,加入乙酸乙酯和水,二相分離,將有機相抽干,得到油狀物質。將其用硅膠柱層析分離(流動相為二氯甲烷:乙酸乙酯 = 9:1),純化,烘干,得到0.29克類白色粉未狀目標化合物,產率約為72%。

          核磁共振譜:1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ10.54(s, 1H, NH), 8.52-8.48(m, 2H, NH+ArH), 8.26(d, J=8.4Hz, 1H, ArH), 8.14(d, J=8.4Hz, 1H, ArH), 8.01-7.97(m, 2H, ArH), 7.54-7.50(m, 2H, ArH), 6.21(s, 1H, OH), 3.70-3.58(m, 2H, CH2), 1.39(s, 3H, CH3)。

          質譜: (ESI, Negative) m/z 458.02 [M-H]-

          實施例14

          (S)-N1-(3-(4-氰基-3-三氟甲基-苯基)-氨基)-2-羥基-2-甲基-3-氧代丙基)-N4-甲基-對苯二甲酰胺(C21H19F3N4O4) 的制備

          在100mL園底燒瓶中加入N-甲基-對苯二甲酸單酰胺(N-Methyl-terephthalamic acid)(0.21克, 1.0444毫摩爾),EDCI (0.20克, 1.3055毫摩爾),HOBT (40毫克, 0.2611毫摩爾),DIPEA(0.30mL, 1.7401毫摩爾),并加入2.0mL無水DMF作為溶劑,攪拌20分鐘。將另一原料 (S)-3-氨基-N-(4-氰基-3-三氟甲基-苯基)-2-羥基-2-甲基丙酰胺 (0.25克, 0.8704毫摩爾)在5.0mL 無水DMF中的溶液加入其中,然后將反應液在氬氣保護下,于室溫攪拌3天。

          薄層色譜法確定反應完成后,加入乙酸乙酯和水,二相分離,將有機相抽干,得到油狀物質。將其用硅膠柱層析分離(流動相為二氯甲烷:乙酸乙酯 = 9:1),純化,烘干,得到0.18克類白色粉未狀目標化合物,產率約為46%。

          核磁共振譜:1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ10.49(s, 1H, NH), 8.48-8.45(m, 2H, NH+ArH), 8.21(d, J=8.4Hz, 1H, ArH), 8.06(d, J=8.4Hz, 1H, ArH), 7.87-7.83(m, 2H, ArH), 7.31-7.24(m, 2H, ArH), 6.17(s, 1H, OH), 3.64-3.51(m, 2H, CH2), 1.37(s, 3H, CH3)。

          質譜: (ESI, Negative) m/z 447.09 [M-H]-

          實施例15

          (S)-4-乙酰基-N-(3-(4-氰基-3-三氟甲基-苯基)-氨基)-2-羥基-2-甲基-3-氧代丙基)-3-氟-苯甲酰胺(C21H17F4N3O4) 的制備

          在100mL園底燒瓶中加入4-乙酰基--3-氟-苯甲酸(0.19克, 1.0444毫摩爾),EDCI (0.20克, 1.055毫摩爾),HOBT (40毫克, 0.2611毫摩爾),DIPEA(0.30mL, 1.7401毫摩爾),并加入2.0mL無水DMF作為溶劑,攪拌20分鐘。向其中加入另一原料 (S)-3-氨基-N-(4-氰基-3-三氟甲基-苯基)-2-羥基-2-甲基丙酰胺 (0.25克, 0.8704毫摩爾)溶解于5.0mL 無水DMF中的溶液,然后將反應液在氬氣保護下,于室溫攪拌3天。

          薄層色譜法確定反應完成后,加入乙酸乙酯和水,二相分離,將有機相抽干,得到油狀物質。將其用硅膠柱層析分離(流動相為二氯甲烷:乙酸乙酯= 9:1),純化,烘干,得到0.18克淡黃色粉未狀目標化合物,產率約為46%。

          核磁共振譜:1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ10.53(s, 1H, NH), 8.51-8.47(m, 2H, NH+ArH), 8.27(d, J=8.6Hz, 1H, ArH), 8.10(d, J=8.6Hz, 1H, ArH), 8.01-7.96(m, 2H, ArH), 7.42(d, J=2.0Hz, 1H, ArH), 6.22(s, 1H, OH), 3.71-3.59(m, 2H, CH2), 1.41(s, 3H, CH3)。

          質譜: (ESI, Negative) m/z 450.07 [M-H]-

          實施例16

          (S)-N-(3-(6-氰基-5-三氟甲基-吡啶-3-基)-氨基)-2-羥基-2-甲基-3-氧代丙基)-4-氟苯甲酰胺(C18H14F4N4O3) 的制備

          在100mL園底燒瓶中加入原料(S)-3-氨基-N-(6-氰基-5-三氟甲基-吡啶-3-基)-2-羥基-2-甲基丙酰胺(0.20克, 0.6939毫摩爾),并加入無水THF 10mL作為溶劑,氬氣保護,溫度降至0℃,加入4-氟苯甲酰氯 (0.10mL, 1.3878毫摩爾, 1.2當量),攪拌10分鐘,再滴加三乙基胺(Et3N, 0.19mL, 1.3878毫摩爾, 2.0當量),溫度升至室溫,攪拌,反應時間5-6小時。

          薄層色譜法確定反應完成后,加水終止反應,加入乙酸乙酯和水,二相分離,將有機相抽干,得到油狀物質。將其用硅膠柱層析分離(流動相為二氯甲烷:甲醇 = 95:5),純化,烘干,得到0.21克類白色粉未狀目標化合物,產率約為75%。

          核磁共振譜:1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ10.52(s, 1H, NH), 9.31(s, 1H, ArH), 8.80(s, 1H, ArH), 8.50-8.48(m, 1H, NH), 7.91-7.86(m, 2H, ArH), 7.31-7.26(m, 2H, ArH), 6.19(s, 1H, OH), 3.67-3.53(m, 2H, CH2), 1.38(s, 3H, CH3)。

          質譜: (ESI, Negative) m/z 409.05 [M-H]-

          II.制劑制備實施例

          制劑實施例A:注射劑的制備

          (一)制劑組成:

          實施例3化合物 25g

          聚山梨酯80 20g

          甘露醇 10g

          注射用水至 5000ml

          (二)制備方法:

          按處方組成,將實施例3化合物、聚山梨酯80和甘露醇,加到4000 m1注射用水中,攪拌溶解后,加注射用水至全量5000m1,繼續攪拌,通過0.22um微孔濾膜進行除菌過濾,濾液以每支5m1無菌灌裝于5ml安瓶中(規格20mg/支),封口,滅菌。

          制劑實施例B:片劑的制備

          (一)處方組成

          處方2-1 通式I化合物片劑處方(每1000片用量)

          處方2-2 通式I化合物片劑處方(每1000片用量)

          處方2-3 通式I化合物片劑處方(每1000片用量)

          (二)制備工藝

          按實施例3片劑處方比例,將實施例3、乳糖及微晶纖維素按200:100:40比例微粉化,按處方比例加入過80目篩的微晶纖維素、預膠化淀粉、微粉硅膠及羧甲基淀粉鈉混合均勻后,加入0.3%HPMC溶液適量,制軟材,18目篩制粒,60℃干燥(控制顆粒水分含量在3%左右),加入過80目篩的硬脂酸鎂與顆粒混勻,16目篩整粒,壓片,包裝。

          III.生物活性檢測

          試劑與儀器設備:帶有放射性標記的二氫睪酮(DHT-d3)和未標記的二氫睪酮(DHT)購于 Sigma-Aldrich(St. Louis, MO)。閃爍液(scintillation solution) 購于 Perkin Elmer Life Sciences (Boston, MA)。羥磷灰石(HAP)懸浮液購于 Bio-Rad Laboratories (Hercules, CA)。緩沖液 (含有10 mM Tris, 1.5 mM EDTA二鈉, 0.25 M 蔗糖, 10 mM 鉬酸鈉, 和1 mM PMSF 然后pH 調至7.4)。羥磷灰石(HAP)洗液(含有50 mM Tris 和1 mM KH2PO4然后pH 調至7.4)。

          在本發明中,通式I所示的芳香酰胺化合物生物活性按照下述方法檢測。將制備實施例所得到的一些本發明化合物和對照化合物溶于DMSO 中,配制成一定濃度的母液,以DMSO將其稀釋成幾個濃度梯度,再用緩沖液將各濃度進行稀釋(10-1 nM 至 104 nM),4℃冰箱保存直至使用。將雄激素受體(制備于雄性SD大鼠的前列腺,雄性Sprague-Dawley大鼠 200-250克)和帶有放射性標記的二氫睪酮(DHT-d3,84 Ci/mmol)加入到緩沖液中,混和均勻,配制成反應液,將各化合物濃度梯度稀釋液分別加入到反應液中,混和均勻,4℃孵育15小時,使化合物及二氫睪酮與雄激素受體充分反應,加入羥磷灰石(HAP)懸浮液,混和均勻,4℃孵育10分鐘,離心,棄去含有游離二氫睪酮的上清液。與雄激素受體結合的二氫睪酮通過吸附于羥磷灰石上而保留在沉淀顆粒中,從而達到分離結合與未結合的放射性標記的配體的目的。向沉淀中加入閃爍液(scintillation solution),混和均勻,WALLACE MicroBeta Trilux 液閃儀(Perkin Elmer)進行放射性強度檢測。根據檢測到的各濃度梯度的放射性強度數值進行數據處理,得到IC50 和 Ki值。具體的生物活性(雄激素受體配體放射性配體競爭結果)見下表:

          上表中的生物活性測定結果表明, 與陽性對照組(比卡魯胺,和恩雜魯胺)比較, 本發明化合物能夠更強地與雄激素受體結合,具有更強地抵抗雄激素受體活性。因此,能夠開發成比現有藥物更安全、有效的、新型芳香酰胺類抗雄激素藥物,并在治療與雄激素相關疾病的研究中具有重要的價值和地位。

          本發明化合物能夠單獨或作為組合物用于治療各種與雄激素相關的疾病,如前列腺癌、前列腺增生、乳腺癌、膀胱癌,還能用于粉刺、多毛、脫發等疾病的治療。

          以上所述僅為本發明的實施例,并非因此限制本發明的范圍,凡是利用本說明書內容所作的等效結構或等效流程變換,或直接或間接運用在其它相關的技術領域,均同理包括在本發明的范圍內。

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